leaflet

Mga kit at mga sistema ng pagsubok para sa enzyme immunoassay. Available ang mga ito sa komersyo alinsunod sa ISO 9000 na kumpleto sa mga kinakailangang reagents at idinisenyo para sa quantitative determination ng ochratoxin sa mga cereal, feed, mga produktong butil, beer at blood serum. Mga Alituntunin sa paggamit ng mga sistema ng pagsubok RIDASCREEN® FAST Ochratoxin A at RIDASCREEN® Ochratoxin A inaprubahan ng Department of Veterinary Medicine ng Federal Agency para sa agrikultura Ministri ng Agrikultura ng Russia sa ilalim ng bilang MUK 5-1-14/1001. Ang mga sistema ay kasama sa "Listahan ng normatibong dokumentasyon na pinahihintulutan para sa paggamit sa mga laboratoryo ng beterinaryo ng estado sa pag-diagnose ng mga sakit ng mga hayop, isda, bubuyog, pati na rin ang pagsubaybay sa kaligtasan ng mga hilaw na materyales ng pinagmulan ng hayop at gulay." Mga sistema ng pagsubok RIDASCREEN® FAST Ochratoxin A tumutugma GOST 34108-2017"Feed, mixed feed, mixed feed raw materials. Determinasyon ng mycotoxin content sa pamamagitan ng direktang solid-phase competitive enzyme immunoassay".

Pagpapasiya ng ochratoxin A sa butil, feed, mga produktong butil, beer at blood serum

Ang Ochratoxin ay isang nakakalason na sangkap na nabuo bilang isang resulta ng mahalagang aktibidad ng fungi ng amag ng genus. Aspergillus at Penicillium. Kasama ng binibigkas na nephrotoxicity, ang ochratoxin ay may hepatotoxicity, teratogenic, carcinogenic at immunosuppressive properties. Sa mga produktong halaman at hayop, ang ochratoxin ay maaaring pumasok sa katawan ng tao. Matatagpuan ito hindi lamang sa mga cereal (13% ng mga positibong sample) at feed ng hayop, kundi pati na rin sa dugo ng baboy (60% ng mga positibong sample) at bato (21% ng mga positibong sample).

Mga Teknikal na Regulasyon ng Customs Union TR CU 021/2011 "Sa kaligtasan ng pagkain" ayusin ang sumusunod na pinakamataas na antas ng nilalaman ng ochratoxin A: sa mga butil ng pagkain, cereal, harina - 0.005 mg / kg (5 μg / kg); sa pagkain ng sanggol, mga produktong pagkain para sa mga preschooler at mga mag-aaral, mga produktong pagkain para sa mga buntis at nagpapasusong kababaihan - hindi pinapayagan (<0,0005 мг/кг).

Bumuo ng pederal na batas № 349084-5 Ang "Mga Teknikal na Regulasyon para sa Mga Produkto ng Alak" ay nagtatatag ng mga kinakailangan para sa nilalaman ng ochratoxin A sa alak na hindi hihigit sa 0.002 mg/l.

Ang draft na Pederal na Batas "Sa mga kinakailangan para sa kaligtasan ng mga produkto ng pagkain at mga proseso ng kanilang produksyon, imbakan, transportasyon, pagbebenta at pagtatapon" ay kinabibilangan din ng isang kinakailangan para sa mandatoryong kontrol ng mga butil ng pagkain para sa ochratoxin A, ang nilalaman nito ay hindi dapat lumampas sa 0.005 mg. /kg. Ang kasalukuyang mga legal na regulasyon ay matatagpuan sa website compact24.com.

Hanggang kamakailan lamang, pangunahing mga pamamaraan ng chromatographic (high performance liquid chromatography, thin layer chromatography) ang ginamit upang kontrolin ang ochratoxin. Higit na mas maginhawang paraan ng enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA, o ELISA), na may napakataas na sensitivity.

Pagtutukoy:	RIDASCREEN® FAST Ochratoxin A	RIDASCREEN® Ochratoxin A 30/15
Format:	Strip plate, 48 balon (6 na piraso ng 8 balon)	Strip plate, 96 na balon (12 strip ng 8 balon)
Mga pamantayan:	0 / 5 / 10 / 20 / 40 µg/l	0 / 50 / 100 / 300 / 900 / 1800 ng/l
Halimbawang paghahanda:	Sample na paggiling, pagkuha, pagsasala	pagkuha, centrifugation/filter (butil, feed); extraction, centrifugation, filtration, shaking, over-extraction, centrifugation, evaporation (beer/serum)
Oras na ginugol:
Limitasyon ng pagtuklas:	0.005 mg/kg	0.001250 mg/kg (butil, feed) 0.000050 mg/kg (beer, blood serum)

Kaugnay na Mga Produkto:

ang isang overlay ay ibinuhos, at sa gitnang bahagi - dalawang mga overlay na may isang minimum na hakbang sa pagitan nila, na nagpapahiwatig ng mga hangganan ng papasok at papalabas na mga sanga ng tape. Ang hakbang sa pagitan ng mga overlay sa paparating na sangay ng tape ay tinutukoy gamit ang pagtitiwala ng isang pag-unlad ng aritmetika, at sa pababang sangay - sa batayan ng isang geometric na pag-unlad. Sa kasong ito, ang unang miyembro ng arithmetic progression ay dapat itakda at isaalang-alang na ang huling puwang sa pagitan ng mga lining ng paparating na sangay ng tape ay ang unang miyembro ng geometric progression, at ang pagkakaiba at denominator ng mga progression ay tinutukoy mula sa kabuuang agwat sa pagitan ng mga lining ng bawat sangay ng tape.

Sa isang drum-shoe brake, ang leveling ng mga partikular na load ay nakakamit sa pamamagitan ng paglalagay sa isang multi-section na brake shoe sa mga papasok at papalabas na bahagi nito ng radially movable linings na magkakaugnay ng isang balancer, ibig sabihin, ginagamit ang prinsipyo ng mga ordinaryong timbang. Ang teknikal na solusyon na ito ay protektado ng isang sertipiko ng copyright para sa isang imbensyon.

Ang pagpapapanatag ng mga temperatura sa ibabaw sa mga pares ng friction ng nabanggit sa itaas na mga aparato ng preno ay nakakamit dahil sa thermoelectric na epekto gamit ang mga thermopile na tumatakbo sa mga mode ng isang thermoelectric refrigerator at isang thermoelectric generator sa mga lining ng papasok at papalabas na mga sanga ng tape, bilang pati na rin sa mga papasok at papalabas na mga seksyon ng friction linings ng sapatos sa pangunahing at karagdagang mga servo brakes, depende sa init ng pagkarga ng kanilang mga friction node. Sa parehong oras, ito ay ibinigay

muling pamamahagi ng thermal energy sa pagitan ng mga ibabaw ng friction unit ng mga preno, na humahantong sa quasi-stabilization nito. Ang pagpapatakbo ng mga thermopile sa mga mode sa itaas ay theoretically substantiated.

Ang makatwirang kontrol sa mga mode ng pagpapatakbo ng isang band-shoe brake ay isinasaalang-alang sa kondisyon na ang antas ng pag-load ng init ng mga layer ng ibabaw ng friction linings ay hindi lalampas sa pinapayagang temperatura para sa kanilang mga materyales. Upang ipatupad ang kontrol ng mga mode ng pagpepreno, maaaring gamitin ang pinagsamang paglamig (thermoelectric na may heat pipe) ng mga pares ng friction ng preno.

Bilang resulta ng paggamit ng teknikal na solusyon na ito, nakamit ang isang pagtaas sa kahusayan ng U2-5-5 winch band-shoe brake.

Kaya, ang mga paraan ng pagkontrol sa dynamic at thermal loading ng friction units ng mga brake device ay ipinahiwatig.

PANITIKAN

1. Pahayag Pat. 63418А (Ukraine). Isang paraan para sa pagkontrol ng mga partikular na load sa mga papasok at papalabas na sanga ng brake band ng isang band-shoe brake / A.I. Volchenko, V.V. Dyachuk, N.A. Volchenko at iba pa - B.I. - 2004. - No. 1. - Sa Ukrainian. lang.

2. A.s. 1682675 A1 USSR. Drum-shoe brake / A.I. Volchenko, V.V. Moskalev, P.A. Skorokhod at iba pa - B. I. - 1991. -

3. Pat. 2221944 C1 Russia. Mga sistema ng paglamig para sa isang mekanismo ng preno na may pagkilos ng servo at isang paraan para sa pagpapatupad nito / A.I. Volchenko, A.A. Petrik, N.A. Volchenko at iba pa - B.I. - 2004. - No. 2.

Kagawaran ng Teknikal na Mekanika

Natanggap noong 22.11.04

DETERMINATION OF OCHRATOXIN A SA GRAPE WINES

E.N. RIKUNOVA, T.I. GUGUCHKINA

North Caucasian Zonal Research Institute of Horticulture and Viticulture

Kabilang sa mga mycotoxin, ang mga lason ng okre ay sumasakop sa isang espesyal na lugar. Ang mga ito ay ginawa ng ilang mga species ng microscopic fungi ng genera Penicillium, Aspergillus, sa partikular na A. ochraceus, P. viridicatum. Ang mga amag na ito ay nasa lahat ng dako, kadalasan sa mainit at mahalumigmig na mga kondisyon, na nagiging sanhi ng pagkabulok ng ubas sa panahon ng matagal na pag-ulan. Ang mga ochratoxin ay may pangkalahatang nakakalason na epekto, nakakaapekto sa mga bato, atay, binabawasan ang pagiging produktibo, may embryotoxic, mutagenic at carcinogenic effect.

Inuri ng International Agency for Research on Cancer ang ochratoxin bilang potensyal na carcinogen at inuri ito bilang hazard class 2B. Kapag ang pagkain ay nahawahan ng ochratoxins, ang isang tao ay nagkakasakit ng Balkan endemic nephropathy.

Ang Patu-lin ay dating natagpuan sa mga produkto ng alak, at kamakailan ay lumitaw ang impormasyon sa nilalaman ng ochratoxin A. Nakontamina nito ang mga butil, gulay, prutas at kanilang mga produkto, feed, malt, beer, juice at alak.

Nakagawa kami ng paraan para sa pagtukoy ng ochratoxin sa grape wine sa pamamagitan ng thin layer chromatography (TLC).

Ang thin-layer chromatography ay isang uri ng liquid chromatography sa isang layer ng sorbent na flat sa isang gilid at nakadeposito sa flat solid substrate. Ang mga pangunahing tampok ng TLC ay dahil sa paggalaw ng eluent (solvent) sa ibabaw ng sorbent layer dahil sa mga puwersa ng capillary, na nagpapadali at nagpapadali sa proseso ng chromatographic. Ang paggamit ng isang unibersal na sorbent - silica gel at isang bukas na layer ay nagbibigay ng kadalian ng sample application, ang posibilidad ng sabay-sabay na pagsusuri ng ilang mga sample, at kadalian ng pagsubaybay sa proseso ng elution.

Ang thin layer chromatography ay nagsasangkot ng paglilinis at konsentrasyon ng mycotoxins. Para dito, ginagamit ang two-dimensional o step chromatography.

fiu. Ang unang yugto ng elution ay paglilinis, ang paghihiwalay ng mga nakakasagabal na sangkap, ang pangalawang yugto ay ang paghihiwalay ng mycotoxins.

Kasama sa pagsusuri ng isang sample ng alak ng TLC ang mga yugto ng paghahanda ng sample, isang plato, isang chromatographic chamber at mga eluent, pati na rin ang isang concentrating cartridge na Diapak C16MT; pagkatapos ay ang aktwal na chromatography, pagsingaw ng eluent mula sa plato, identification, quantification at dokumentasyon.

Ang bentahe ng pamamaraan ay hindi lamang ang pagiging simple nito, pagiging naa-access, ang posibilidad ng paggamit ng mga tiyak na pagbuo ng mga ahente, na nagpapatunay na ang sangkap ay kabilang sa nais, mas mababang mga kinakailangan para sa paglilinis ng mga extract, kundi pati na rin ang posibilidad ng pagtukoy ng maliit na halaga ng ochratoxin - ang Ang limitasyon sa pagtuklas ay 0.1 μg / cm3.

Upang matukoy ang mycotoxin ochratoxin A sa mga materyales ng alak at alak, ang 10 cm3 ng sample ay ipinapasa sa concentrating cartridge na Diapak C16MT, na tumutuon sa sample ng 10 beses, at sa wakas ay dinalisay ng 1 cm3 ng acetonitrile. Ang nagresultang katas sa halagang 5 μl at ang pamantayan ay inilalapat sa mga TLC plate at ang chromatographic separation (elution) ay isinasagawa sa isang inihandang chromatographic chamber na may naaangkop na eluent. Ang sistema ng mga solvents sa anyo ng isopropanol at ammonia ay naging pinakamainam para sa paghihiwalay ng mycotoxin. Ito ay medyo pabagu-bago at may mababang retention coefficient.

Rf sa sorbent. Ang mga mycotoxin spot ay nabuo sa pamamagitan ng pag-iilaw na may mahabang wavelength (365 nm) ultraviolet light. Kapag nalantad sa UV rays, ang mga mycotoxin spot ay kumikinang na asul-berde.

Ang pagkakakilanlan at quantitative determination ng ochratoxin ay isinagawa sa pamamagitan ng pag-scan ng densometry sa isang Sorbfil densitometer na may espesyal na programa para sa pagproseso ng mga resulta ng pagsusuri at pagkalkula ng mga parameter ng chromatogram.

Ang paggamit ng densitometer ay ginagawang quantitative ang paraan ng TLC, na maihahambing sa resolusyon sa HPLC, habang pinapanatili ang lahat ng mga pakinabang ng TLC.

Ang iminungkahing paraan ay sinubukan sa mga sample ng alak na may paunang pagpapakilala ng ilang partikular na halaga ng ochratoxin. Ang pamamaraan ay nagbibigay-daan sa iyo upang mabilis at tumpak na kontrolin ang nilalaman ng ochratoxin sa mga produkto ng alak.

PANITIKAN

1. Kretova L. Glunev L. I. Mycotoxins. Contamination ng mga produkto at analytical control. - M.: Agrprogress, 2000.

2. Mga Pamamaraan ng OIM Assembly. - Paris, 2000. - S. 57-59.

3. Gabay sa modernong thin layer chromatography / Ed. O.G. Larionova // Batay sa mga materyales ng school-seminar sa thin layer chromatography. - M., 1994.

Laboratory ng teknolohiya sa paggawa ng alak

Natanggap noong 08.09.04

N.T. SIYUKHOVA

Maykop State Technological University

Sa kasalukuyan, ang seryosong atensyon ay binabayaran sa mga isyu ng kontaminasyon ng mga pananim na pang-agrikultura na may mga nakakalason na sangkap ng iba't ibang kalikasan, kabilang ang mga pestisidyo. Kabilang sa mga pananim na pinakaginagamot sa mga kemikal na paraan ng proteksyon laban sa mga peste at sakit, ang ubas ay namumukod-tangi. Dahil sa paulit-ulit na paggagamot na proteksiyon sa bawat panahon ng paglaki, ang mga ubasan ay matagal nang itinuturing na isang uri ng nagtitipon ng mga kemikal na mapanganib sa kapaligiran.

Kabilang dito ang mga organophosphorus compound, na nailalarawan sa pamamagitan ng mas mataas na panganib ng akumulasyon sa mga ginagamot na lugar at nangunguna sa mga tuntunin ng praktikal na aplikasyon. Ang mga gamot na ito ay naipon sa mga selula ng halaman. Ang mga berry ay pinaka-mapanganib at masinsinang nahawahan sa kanila, na sa huli ay nakakaapekto sa kalidad at kaligtasan sa kapaligiran ng mga produktong ginawa mula sa mga ubas. Isinasaalang-alang ang mataas na toxicity at katatagan ng mga organophosphorus compound at ang kanilang mga metabolite, ang pagpapasiya ng kontaminasyon ng mga produkto ng ubas sa pamamagitan ng mga ito ay may malaking pang-agham at praktikal na kahalagahan.

Sa mga site ng produksyon ng dalubhasang sakahan AF "Fanagoria" (Temryuk distrito) ay natupad (1999-2002) toxicological kontrol ng pulang ubas varieties. Ang mga sample ay kinuha sa panahon ng pag-aani, at ang pagsusuri ng mga produkto para sa nilalaman ng mga natitirang halaga ng organochlorine at phosphorus insecticides ay isinagawa sa isang accredited testing toxicological laboratory ng SKZNIISiV. Ang prinsipyo ng pagpili ng mga plot ng ubas para sa sampling ay batay sa katotohanan na ang ani ng ubas na nakolekta mula sa kanila ay ginamit para sa pagproseso ng pabrika at ang paghahanda ng mga tuyong red wine sa micro wine shop ng laboratoryo sa pagproseso ng ubas ng SKZNIISiV.

Kapag nagpaplano ng mga eksperimento upang pag-aralan ang pagpapanatili ng mga nakakalason na sangkap sa mga ubas, ang posibleng impluwensya ng dalawang mga kadahilanan ay isinasaalang-alang, na magkakasamang tumutukoy sa pagpapakita ng potensyal na panganib ng mga insecticides na pumapasok sa mga nakatanim na ubas: ang pagpasok ng mga nakakalason na nalalabi mula sa lupa ng mga plantasyon at mula mismo sa halaman bilang resulta ng kasalukuyang mga pana-panahong paggamot

Ang mga ochratoxin ay ginawa ng ilang uri ng fungi. Aspergillus at Penicillium. Ang mga pangunahing producer ay A.ochraceus at P. viridicatum. Ang mga mushroom na ito ay matatagpuan sa lahat ng dako. Aspergillus gumagawa ng mga ochratoxin sa mataas na temperatura at halumigmig, at Penicillium nasa 5°C na. Ang mga ochratoxin ay lubhang nakakalason na mga compound na may malinaw na teratogenic effect.

Ang Ochratoxins A, B, at C ay isang pangkat ng mga compound na nauugnay sa istruktura na mga isocoumarin na nauugnay sa L-phenylalanine peptide bond. Depende sa likas na katangian ng mga radical, ang iba't ibang uri ng ochratoxin ay nabuo (Talahanayan 2.3.).

Ang Ochratoxin A ay isang walang kulay na mala-kristal na substansiya, bahagyang natutunaw sa tubig, moderately natutunaw sa polar organic solvents (methanol, chloroform), pati na rin sa isang may tubig na solusyon ng sodium carbonate. Sa isang chemically purong anyo, ito ay hindi matatag at napaka-sensitibo sa liwanag at hangin, ngunit sa isang ethanol solution maaari itong manatiling hindi nagbabago sa loob ng mahabang panahon. Sa UV light mayroon itong berdeng fluorescence.

Ang Ochratoxin B ay isang crystalline substance, isang analogue ng ochratoxin A, na hindi naglalaman ng chlorine atom. Ito ay humigit-kumulang 50 beses na mas nakakalason kaysa sa ochratoxin A. Sa UV light, mayroon itong asul na fluorescence.

Ang Ochratoxin C ay isang amorphous substance, ethyl ester ng ochratoxin A, na malapit dito sa toxicity, ngunit hindi natagpuan bilang isang natural na pagkain at feed contaminant. Sa Y-light mayroon itong maputlang berdeng pag-ilaw.

Ang mga ochratoxin ay nabibilang sa mga nakakalason na mycotoxin, may mataas na toxicity sa atay, bato, teratogenic at immunosuppressive na mga katangian, at isang binibigkas na hemolytic effect. Sa mga ochratoxin, ang ochratoxin A ang pinakanakakalason (LD 50 = 3.4 mg/kg, (mga sisiw na nasa araw na, oral)). Ito ay mas nakakalason kaysa sa mga aflatoxin. Ang iba pang mycotoxins ng grupong ito ay isang order ng magnitude na hindi gaanong nakakalason.

Ang biochemical, molekular, cellular na mekanismo ng pagkilos ng mga ochratoxin ay hindi lubos na nauunawaan. Alam na ang ochratoxin A ay pumipigil sa synthesis ng protina at metabolismo ng carbohydrate, sa partikular na glycogenosis, sa pamamagitan ng pagpigil sa aktibidad ng phenylalanine, isang tRNA, isang partikular na enzyme na gumaganap ng isang mahalagang papel sa paunang yugto ng synthesis ng protina.

Ang Ochratoxin A ay matatagpuan sa mais, barley, trigo, oats, at barley. Mahalaga at mapanganib na ang ochratoxin A ay matatagpuan sa mga produktong hayop (ham, bacon, sausages) sa mataas na kontaminasyon ng mga butil ng feed at feed ng hayop. Ang Ochratoxin B ay bihira. Ang mga ochratoxin ay nakakaapekto rin sa lahat ng bunga ng hortikultural na pananim. Lalo na apektado ang mga mansanas: hanggang 50% ng pananim ay maaaring kontaminado ng mycotoxins.

Dapat pansinin na ang mga ochratoxin ay mga matatag na compound. Kaya, halimbawa, sa matagal na pag-init ng trigo na nahawahan ng ochratoxin A, ang nilalaman nito ay nabawasan lamang ng 32% (sa temperatura na 250–300ºС). Kaya, ang paglaganap sa mga produktong pagkain, toxicity at pagtitiyaga ng mga ochratoxin ay nagdudulot ng tunay na panganib sa kalusugan ng tao.

Mga Paraan ng Pagsusuri

Ang Ochratoxin A ay matatagpuan sa mga oxidized na pagkain. Ito ay madaling natutunaw sa maraming mga organikong solvent, na ginagamit para sa pagkuha. Ang pinakakaraniwang ginagamit ay ang pagkuha gamit ang chloroform at isang may tubig na solusyon ng phosphoric acid, na sinusundan ng purification sa isang column at quantitative determination gamit ang TLC method.

Isang paraan ng HPLC ay binuo din. Bago ang pagsusuri ng HPLC, ang sample ay inihanda tulad ng sumusunod. Ang dinurog na sample ay ginagamot sa pinaghalong 2 M hydrochloric acid at 0.4 M na solusyon sa magnesium chloride. Pagkatapos ng homogenization, kunin gamit ang toluene sa loob ng 60 minuto. Ang halo ay centrifuge. Ang centrifuge ay dumaan sa isang column ng silica gel at hinugasan ng pinaghalong toluene at acetone (mobile phase). Ang Ochratoxin A ay pinahiran ng pinaghalong toluene at acetic acid (9:1) at pinatuyo sa 40°C. Ang nalalabi ay natunaw at sinala. Ang pagsusuri ay isinasagawa gamit ang HPLC.

Bilang karagdagan, ang isang bilang ng mga bioassay sa hipon at bakterya ay binuo, ngunit ang mga resulta na nakuha ay hindi pinapayagan ang paggamit ng mga pamamaraang ito para sa pagtukoy ng mga ochratoxin.



Ang mga mushroom - mga producer ng ochratoxins - ay fungi ng genera na Aspergillus at Penicillium. Ang mga unang ulat sa toxicity sa mga duck ng mga basurang produkto ng fungus A. ochraceus ay ginawa ni Scott noong 1965. Sa mga sumunod na taon, isang malaking bilang ng mga pag-aaral ang isinagawa upang ihiwalay ang mga basura ng fungus na ito sa purong anyo, upang tukuyin ang kemikal na istraktura ng mga nakahiwalay na mycotoxins, upang pag-aralan ang kanilang biological na aktibidad, ang mga kondisyon para sa pagbuo ng lason, mga pamamaraan ng pagpapasiya sa iba't ibang mga biological substrates. Ang mga ochratoxin ay pinangalanan ayon sa uri ng fungus na unang gumawa ng mycotoxin na ito.

Apat na ochratoxin, A, B, C, at D, ang nahiwalay sa kultura ng fungus A. ochraceus. Ang Ochratoxin A ay may pinakamalaking sanitary at toxicological significance. Natutunaw ito nang maayos sa acetone, benzene, acetonitrile, chloroform, at alkohol. Kapag nakikipag-ugnayan sa iron chloride, ito ay bumubuo ng isang pulang kulay na kumplikado, malakas na mga kumplikadong may alkalis.

Ang pangunahing fungi na gumagawa ng ochratoxin ay A. ochraceus at P. veridicatum. Sa mga bansang may mainit na klima, ang feed ay kadalasang nahawahan ng ochratoxin mula sa fungus A. ochraceus, sa mga bansang may mapagtimpi na klima - mula sa fungus P. veridicatum. Ang pinakamainam na temperatura ng substrate, kung saan ang pinakamalaking pagbuo ng lason ay nangyayari sa panahon ng paglilinang, ay 28 ° С para sa A. ochraceus fungi at 20 ° С para sa P. veridicatum fungi.

Ayon kay N. V. Volkov (1980), sa 316 na fungal isolates na nakahiwalay sa limang pig breeding complex ng Ukraine, 106 strains (33.5%) ang itinalaga sa A. ochraceus fungi. Mula sa halagang ito, apat na isolates ang nabuo ochratoxin A.

Ang mga mushroom - mga producer ng ochratoxin A - ay madalas na matatagpuan sa feed sa Russia, ngunit napakakaunting mga kaso ng sakit sa hayop ang nairehistro. Ito ay dahil sa kakulangan ng isang sensitibo at tiyak na paraan para sa pagtukoy ng ochratoxin A sa feed. Kamakailan lamang, ang ochratoxicosis A ay naitatag sa isang bilang ng mga sakahan ng baboy sa mga rehiyon ng Kursk at Belgorod (GP Kononenko et al., 1999).

Ang mga ochratoxin, tulad ng iba pang mycotoxin, ay medyo mabilis na nawasak sa katawan ng mga hayop. Gayunpaman, may mga ulat na, depende sa dosis, ang mycotoxin ay maaaring mapanatili sa tissue ng kalamnan at kalamnan ng mga baboy nang hanggang 2 linggo, sa atay hanggang 3 at sa bato hanggang 4 na linggo. Samakatuwid, kinakailangang itakda ang panahon ng pagpatay ng mga hayop pagkatapos ng huling kaso ng paggamit ng mycotoxin sa katawan sa 4 na linggo. Posible rin na ang mycotoxin ay ilalabas kasama ng gatas kung ito ay pumasok sa katawan na may feed sa medyo malaking dami.

Ang Ochratoxin A ay tumutukoy sa mga nakakalason na compound - LD50 para sa mga hayop sa laboratoryo na may isang solong oral administration na 20-28 mg/kg ng timbang ng hayop, para sa 7-araw na manok na 11-15 mt/kg. Ang mycotoxin ay may malinaw na pagsasama-sama. Ang pinaka-sensitibo dito ay mga baboy, lalo na ang mga bata, pagkatapos ay mga ibon.

Kapag ang nilalaman ng mycotoxin sa feed ay 0.2-0.4 mg / kg ng feed sa mga baboy, kahit na may matagal na pagpapakain, walang mga klinikal na palatandaan ng pagkalasing, ngunit ang pagbaba sa pagtaas ng timbang at polyuria ay sinusunod. Para sa mga manok, ang subtoxic na dosis ay 0.6-0.8 mg/kg ng feed, ang nakakalason na dosis ay 1.5-2.0 mg/kg. Sa pagtaas ng nilalaman ng ochratoxin A sa feed hanggang 5 mg/kg, ang mga palatandaan ng pagkalason at pagkamatay ng mga indibidwal na hayop ay ipinahayag sa mga baboy at manok.

Toxikodynamics. Hindi sapat na malinaw. Ang Ochratoxin A ay higit na kumikilos sa mga bato, kaya sa Denmark, kung saan unang naiulat ang mycotoxicosis na ito sa mga baboy, tinawag itong "porcine mycotoxic nephropathy". Ito ay itinatag na ang mga ochratoxin, na pumapasok sa dugo, ay medyo mabilis na nagbubuklod sa mga protina nito. Marahil, ang pagpasok sa acidic na kapaligiran ng mga bato, ang mycotoxin ay pinakawalan at nagpapakita ng nephropathic na epekto nito.

Klinika. Ang talamak na ochratoxicosis, na nangyayari nang mas madalas sa mga praktikal na kondisyon, ay nagpapakita ng sarili nang mahina. Sa mga hayop, ang pagkauhaw ay tumataas, ang polyuria ay ipinahayag, at ang pagbaba sa pagtaas ng timbang. Sa dugo, sa ilang mga kaso, ang leukocytosis, isang pagtaas sa bilang ng mga lymphocytes, at isang pagbawas sa basophils ay nabanggit. Sa mga manok, ang pangkalahatang pang-aapi, ruffled feathers, at pagbaba sa produktibidad ay sinusunod. Ayon sa ilang mga may-akda, lumilitaw ang mga dilaw na spot sa balat ng itlog.

Paggamot. Walang mga tiyak na paggamot. Una sa lahat, ang pagkain na naglalaman ng ochratoxin A o apektado ng amag ay dapat na hindi kasama sa diyeta. Mabisang ipasok ang iba't ibang adsorbents sa feed, tulad ng zeolites, glauconites, atbp.

mga pagbabago sa pathological. Ang pinaka-katangian ng ochratoxicosis ay pinsala sa bato. Bilang isang patakaran, sila ay pinalaki, ang kapsula ay minsan ay konektado sa cortical layer. Sa seksyon, ang cortical layer ay maputla; sa ilalim ng kapsula ay maaaring may mga cyst na 1-2 mm ang laki. Histological pagsusuri nabanggit nekrosis ng mga cell ng proximal tubules, paglago, connective tissue sa cortical layer.

Sa lukab ng tiyan kung minsan ay nakakahanap ng mas mataas na nilalaman ng likido. Sa ilang mga kaso, ang atay ay pinalaki at ang mga selula nito ay necrotically nagbago.

Vetsanekspertiza. Sa kaso ng sapilitang pagpatay ng mga hayop sa kaso ng ochratoxicosis, ang mga organo at tisyu, at lalo na ang mga bato, ay dapat suriin para sa pagkakaroon ng mycotoxin. Ang MRL para sa ochratoxin sa karne at offal ay hindi pa naitatag. Kung ang mycotoxin residues ay matatagpuan, ang bangkay at panloob na organo ay itatapon.

Konsentrasyon ng ochratoxin A sa sample, mg/kg

Mga kaugnay na limitasyon ng error (index ng katumpakan) (±d), %, R = 0,95

Pamantayang paglihis ng kakayahang maulit (s r), %

Limitasyon sa pag-uulit ( r), %

Pagkakumpleto ng pagkuha ng mga sangkap, %

4.2. Mga pantulong na kagamitan

Apparatus para sa pag-alog ng mga sample type АВУ-6С o katulad
Rotary evaporator IR-1M na may bitag o katulad
Laboratory drying cabinet na may error sa pagpapanatili ng temperatura ±2.5 sa hanay mula 50 hanggang 350 °C
Refrigerator sambahayan
Electric laboratory mill EM-3A o katulad na pH meter	TU 46-22-236-79
Magnetic stirrer type MM 5 na may stirrer bar	TU 25-11.834-80
Flat-bottomed conical flasks 250 cm3 na may NSh 29, type KnKSh 250-29/32	GOST 10394-74
Mga bote ng madilim na salamin na tornilyo (masama), 7 cm3
Volumetric flasks, kapasidad 100, 500, 1000 cm3 type 2-100-2,2-500-2
Laboratory ng mga funnel
Mga flasks na hugis peras, 10 cm3, na may NSh 14.5, uri ng GrKSh-10-14/23	GOST 10394-72

4.3. Mga reagents at materyales

. Paghahanda para sa mga sukat

5.1. Paghahanda ng mga karaniwang solusyon ng ochratoxin A

Upang maghanda ng isang karaniwang solusyon sa pag-iimbak (ang konsentrasyon ng ochratoxin A ay 10 ng/µl), isang 5 mg na sample ng crystalline ochratoxin A ay inilalagay sa isang volumetric flask na may volume na 500 cm3, 50 cm3 ng pinaghalong toluene-acetic acid (98:2% vol.) ay idinagdag, lubusan na halo-halong hanggang sa kumpletong paglusaw ng sangkap at dalhin ang parehong pinaghalong solvents sa marka. Upang maitatag ang eksaktong konsentrasyon ng solusyon sa imbakan, ang optical density nito ay sinusukat sa isang wavelength na 333 nm (D333). Ang konsentrasyon ng solusyon ay kinakalkula ng formula:

Para sa paghahanda ng mga gumaganang solusyon ng ochratoxin A na may konsentrasyon na 0.005; 0.05 at 0.1 ng/µl, ayon sa pagkakabanggit, 50, 500 at 1000 µl ng isang solusyon na may konsentrasyon na 0.5 ng/µl ay kinuha, evaporate sa pagkatuyo at dissolved sa 5 cm3 ng mobile phase.

Ang imbakan na solusyon ng ochratoxin A ay inilalagay sa isang lalagyan ng salamin na may takip sa lupa sa isang madilim, malamig na lugar (sa temperatura na humigit-kumulang 0 ° C) hanggang sa isang taon at ginagamit upang maghanda ng mga gumaganang karaniwang solusyon. Ang mga gumaganang karaniwang solusyon ay iniimbak sa madilim na mga bote ng salamin sa isang madilim, malamig na lugar (sa temperatura na humigit-kumulang 0 °C) sa loob ng 1 buwan.

Bago gamitin ang mga gumaganang standard na solusyon, dapat silang dalhin sa temperatura ng silid at pagkatapos lamang dapat buksan ang mga stopper.

5.2. Paghahanda ng phosphate buffer solution, pH = 7.4

Ang pagtimbang ng 1.15 g ng sodium phosphate na napalitan ng 12-aqueous na may mass na 1.15 g, isang pagtimbang ng sodium ng monosubstituted 2-aqueous na may mass na 0.124 g at isang pagtimbang ng sodium chloride na may mass na 1.74 g ay inilipat sa isang volumetric flask na may kapasidad na 100 cm3, 10 - 20 cm3 ng distilled water ay idinagdag. Haluin at dalhin ang dami ng solusyon sa prasko sa marka. Buhay ng istante - 1 buwan sa refrigerator.

5.3. Paghahanda ng mga solvent mixtures

Toluene-acetic acid (98:2 % tungkol sa.).

Magdagdag ng 20 cm3 ng acetic acid sa isang 1000 cm3 volumetric flask at, habang hinahalo, gumawa ng hanggang marka gamit ang toluene. Shelf life - 1 buwan sa isang madilim na cool na lugar.

Acetonitrile-tubig (60:40 % tungkol sa.).

Magdagdag ng 600 cm3 ng acetonitrile sa isang 1000 cm3 volumetric flask at, habang hinahalo, gumawa ng tubig hanggang sa marka. Shelf life - 1 buwan sa isang madilim na cool na lugar.

Acetonitrile-tubig (60:40 % tungkol sa.; pH = 3 ,0 ).

Magdagdag ng 600 cm3 ng acetonitrile sa isang 1000 cm3 volumetric flask at, habang hinahalo, gawin hanggang sa marka gamit ang bidistilled water. Sa pamamagitan ng pagdaragdag ng phosphoric acid, ang pH ng pinaghalong ay nababagay sa isang halaga na katumbas ng 3.0. Shelf life - 1 buwan sa isang madilim na cool na lugar.

methanol-acetic acid (98:2 % tungkol sa.).

Magdagdag ng 20 cm3 ng acetic acid sa isang 1000 cm3 volumetric flask at, habang hinahalo, gumawa ng methanol hanggang sa marka. Shelf life - 1 buwan sa isang madilim na cool na lugar.

. Sampling at paghahanda ng mga sample para sa pagsusuri

6.1. Pagpili ng sample

Upang isaalang-alang ang mga detalye ng pag-sample ng ilang uri ng mga produkto, ang isa ay dapat na magabayan ng kasalukuyang regulasyon at teknikal na dokumentasyon:

"mais. Mga tuntunin sa pagtanggap at mga pamamaraan ng sampling” GOST 13586.3-83;

"Krupa. Mga panuntunan sa pagtanggap at mga pamamaraan ng sampling” GOST 26312.1-84;

“Arina at bran. Mga paraan ng pagtanggap at sampling” GOST 27668-88;

“Mga produktong de-latang pagkain. Pag-sample at paghahanda ng mga ito para sa pagsubok" GOST 8756.0-70.

Ang mga sample para sa pagsusuri, na kinatawan ng konsentrasyon ng mycotoxins para sa buong batch, ay dapat kunin mula sa isang pre-homogenized na average (paunang) sample na tumitimbang ng 2 kg.

6.2. Halimbawang paghahanda para sa pagsusuri

Ang mga napiling sample ay dinudurog ng 1 - 2 min sa isang laboratory mill. Sa kasong ito, dalawang parallel sample ang ginagamit.

6.2.1. Extraction

Ang isang bahagi ng 25 g ng dinurog na sample ay inilalagay sa isang 250 cm flat-bottomed conical flask, 100 cm3 ng pinaghalong acetonitrile-water (60:40% vol.) ay idinagdag. I-extract sa isang shaker sa loob ng 30 minuto. Ang nagresultang timpla ay sinala sa pamamagitan ng isang asul na laso na may pleated na papel na filter. I-withdraw ang 10 ml ng filtrate at magdagdag ng 90 ml ng phosphate buffer solution, pH = 7.4.

6.2.2. Paglilinis ng katas

Ang 100 ML ng nagresultang timpla ay inilapat sa haligi ng immunoaffinity sa isang rate ng 1-2 patak bawat segundo, hugasan ng 20 cm3 ng isang phosphate buffer solution, pH = 7.4. Ang Ochratoxin A ay na-eluted na may 3 cm3 ng methanol-acetic acid (98:2% sa dami).

. Pagkuha ng mga sukat

7.1. Paghahanda ng sample ng pagsubok

Ang eluate ay sumingaw sa pagkatuyo. Ang tuyong nalalabi ay natunaw sa 400 μl ng mobile phase (solusyon A).

7.2. Mga kondisyon ng Chromatography

Mga kondisyon ng HPLC: mobile phase - acetonitrile-water (60:40% vol.; pH = 3.0); rate ng mobile phase - 1.5 cm3/min.

Ang fluorimetric detector ay nakatakda sa isang wavelength ng kapana-panabik na radiation na 333 nm, isang emission filter na may bandwidth na 466 nm ay naka-install sa emission line.

Para sa sample analysis, 50 μl ng test sample (solusyon A) ay ini-inject sa chromatograph injector gamit ang microsyringe. Sa pagkakaroon ng isang peak na tumutugma sa oras ng pagpapanatili sa ochratoxin A, kalkulahin ang masa ng ochratoxin A sa isang sundot gamit ang isang calibration curve.

. Pagproseso ng mga resulta ng pagsukat

8.1. Konstruksyon ng isang nagtapos na pagtitiwala

Upang makabuo ng isang graph ng pagkakalibrate, isang chromatographic analysis ng isang serye ng mga gumaganang solusyon ng mga pamantayan ay isinasagawa. Gamit ang isang microsyringe, 50 µl ng standard working solution na may konsentrasyon na 0.005 ng/µl ay itinurok sa injector, na tumutugma sa 0.25 ng ochratoxin A. Ang parehong ay ginagawa para sa iba pang mga standard na solusyon na may konsentrasyon na 0.05 at 0.10 ng/ µl, na tumutugma naman sa 2.5 at 5.0 ng ng ochratoxin A bawat iniksyon. Sa ilalim ng mga kundisyong ito, ang oras ng pagpapanatili para sa ochratoxin A ay nasa hanay na 4 hanggang 5 minuto. Batay sa data na nakuha, ang isang calibration graph ay binuo (depende sa lugar ng chromatographic peak sa masa ng ochratoxin A sa iniksyon).

Ang resulta ng pagsusuri ay ipinakita sa form (na may posibilidad R = 0,95):

D - ganap na limitasyon ng error:

d ay ang limitasyon ng kamag-anak na error ng pamamaraan (index ng katumpakan), % (Talahanayan 1).

* 0.0001 mg/kg - limitasyon ng pagtuklas.

. Mga kinakailangan sa kwalipikasyon ng performer

Upang maisagawa ang pagsusuri ng ochratoxin A sa mga produkto ng butil at butil, ang mga taong may espesyal na mas mataas na edukasyon o pangalawang espesyalisadong edukasyon na nagmamay-ari ng pamamaraan ng pagsusuri ng HPLC, ay nakatanggap ng angkop na pagsasanay at may karanasan sa laboratoryo ng kemikal.

. Mga kondisyon sa pagsukat

Temperatura sa paligid mula 15 hanggang 25 °C.

Ang kamag-anak na kahalumigmigan ng hangin ay hindi hihigit sa 80% sa 25 ° С.

Presyon ng atmospera 730 - 760 mm Hg.

Boltahe ng power supply: 210 - 220 V. AC frequency: 45 - 50 Hz.