листівка

Набори і являють собою тест-системи для імуноферментного аналізу. Вони випускаються серійно відповідно до ISO 9000 в комплекті з необхідними реагентами і призначені для кількісного визначення охратоксину в зернових культурах, кормах, зернових продуктах, пиві і сироватці крові. Методичні вказівкипо використанню тест-систем RIDASCREEN ® FAST Ochratoxin Аі RIDASCREEN ® Ochratoxin Aзатверджені Управлінням ветеринарії Федерального агентства по сільському господарствуМінсільгоспу Росії за номером МУК 5-1-14 / 1001.Системи включені в "Перелік нормативної документації, дозволеної для використання в державних ветеринарних лабораторіях при діагностиці хвороб тварин, риб, бджіл, а також контролю безпеки сировини тваринного і рослинного походження". Тест-системи RIDASCREEN ® FAST Ochratoxin Авідповідають ГОСТ 34108-2017"Корми, комбікорми, комбикормовое сировину. Визначення вмісту мікотоксинів прямим твердофазним конкурентним імуноферментним методом".

Визначення охратоксину А в зерні, кормах, зернових продуктах, пиві і сироватці крові

Охратоксин - це отруйна речовина, що утворюється в результаті життєдіяльності пліснявих грибів роду Aspergillusі Penicillium. Поряд з вираженою нефротоксичність, охратоксин володіє гепатотоксичностью, тератогенні, канцерогенні і імунодепресивними властивостями. З продуктами рослинного і тваринного походження охратоксин може потрапляти в організм людини. Він виявляється не тільки в зернових культурах (13% позитивних проб) і кормах для тварин, а й в свинячої крові (60% позитивних проб) і нирках (21% позитивних проб).

Технічний Регламент Митного Союзу ТР ТЗ 021/2011 "Про безпеку харчової продукції"регламентують наступний граничний рівень вмісту охратоксину А: в продовольчому зерні, крупах, борошні - 0,005 мг / кг (5 мкг / кг); в дитячому харчуванні, продуктах харчування для дошкільнят і школярів, продуктах для харчування вагітних і годуючих жінок - не допускається (<0,0005 мг/кг).

Проект федерального закону № 349084-5 "Технічний регламент на виноробну продукцію" встановлює вимоги до змісту у вині охратоксину А не більше 0,002 мг / л.

У проект Федерального закону "Про вимоги до безпеки харчових продуктів і процесів їх виробництва, зберігання, перевезення, реалізації та утилізації" також включено вимогу обов'язкового контролю продовольчого зерна на охратоксин А, зміст якого не повинно перевищувати 0,005 мг / кг. З актуальними законодавчими нормативами можна ознайомитися на сайті compact24.com.

До недавнього часу для контролю охратоксину застосовувалися переважно хроматографічні методи (високоефективна рідинна хроматографія, тонкошарова хроматографія). Значно більш зручний метод імуноферментного аналізу (ELISA, або ІФА), що володіє дуже високою чутливістю.

Специфікація:	RIDASCREEN ® FAST Ochratoxin А	RIDASCREEN ® Ochratoxin A 30/15
формат:	Стріпована плашка, 48 лунок (6 стрипів по 8 лунок)	Стріпована плашка, 96 лунок (12 стрипів по 8 лунок)
стандарти:	0/5/10/20/40 мкг / л	0/50/100/300/900/1800 нг / л
Пробопідготовка:	Розмол проби, екстракція, фільтрування	екстракція, центрифугування / фільтрування (зерно, корми); екстракція, центрифугування, фільтрування, струшування, переекстракція, центрифугування, випаровування (пиво / сироватка крові)
Затрати часу:
Межа виявлення:	0,005 мг / кг	0,001250 мг / кг (зерно, корми) 0,000050 мг / кг (пиво, сироватка крові)

Суміжні продукти:

новлюють по одній накладці, а в середній частині - дві накладки з мінімальним кроком між ними, які вказують на межі набігає і збігає гілок стрічки. Крок між накладками на набігає гілки стрічки визначається за допомогою залежності арифметичної прогресії, а на збігає - по залежності геометричній прогресії. При цьому першим членом арифметичної прогресії необхідно задатися і врахувати, що останній зазор між накладками набігає гілки стрічки є першим членом геометричній прогресії, а з сумарного зазору між накладками кожної гілки стрічки визначається різниця і знаменник прогресій.

У барабанно-колодковому гальмі вирівнювання питомих навантажень досягається за рахунок розміщення в багатосекційній гальмівний колодці на її набігає і збігає частини рухомих в радіальному напрямку накладок, пов'язаних між собою балансиром, т. Е. Використаний принцип звичайних ваг. Дане технічне рішення захищено авторським свідоцтвом на винахід.

Стабілізація поверхневих температур в парах тертя вищевідзначених гальмівних пристроїв досягається за рахунок термоелектричного ефекту з застосуванням термобатарей, що працюють в режимах термоелектрохолодільніка і термоелектрогенераторов в накладках набігає і збігає гілок стрічки, а також набігаючих і збігають ділянках фрикційних накладок колодки в основному і додатковому сервогальма в залежності від теплонавантаженому їх фрикційних вузлів. При цьому забезпечується пе-

перерозподіл теплової енергії між поверхнями фрикційних вузлів гальм, що і веде до її квазістабілізаціі. Робота термобатарей в зазначених вище режимах теоретично обгрунтована.

Раціональне управління режимами експлуатації стрічково-колодкового гальма розглядається за умови, що рівень теплонавантаженому поверхневих шарів фрикційних накладок не перевищує допустимої температури для їх матеріалів. Для реалізації управління гальмівними режимами може бути використано комбіноване охолодження (термоелектричне з тепловою трубою) пар тертя гальма.

В результаті застосування даного технічного ре -шенія було досягнуто підвищення ефективності стрічково-колодкового гальма лебідки У2-5-5.

Таким чином, визначені шляхи керування динамічною і теплової нагруженностью фрикційних вузлів гальмівних пристроїв.

ЛІТЕРАТУРА

1. Деклараційний пат. 63418А (Україна). Спосіб управ -льон питомими навантаженнями на набігає і збігає гілках гальмівної стрічки стрічково-колодкового гальма / А.І. Вольченко, В.В. Дячук, Н. А. Вольченко та ін. - Б.І. - 2004. - № 1. - На укр. яз.

2. А.с. 1682675 А1 СРСР. Барабанно-колодкового гальма / А.І. Вольченко, В.В. Москальов, П.А. Скороход та ін. - Б. І. - 1991. -

3. Пат. 2221944 С1 Росія. Системи охолодження гальмівної -го механізму з серводействіем і спосіб її здійснення / А.І. Вольченко, А. А. Петрик, Н.А. Вольченко та ін. - Б.І. - 2004. - № 2.

Кафедра технічної механіки

Надійшла 22.11.04 р

ВИЗНАЧЕННЯ охратоксин А В виноградні вина

Е.Н. РІКУНОВА, Т.І. ГУГУЧКІНА

Північно-Кавказький зональний науково-дослідний інститут садівництва і виноградарства

Серед мікотоксинів особливе місце займають охра-токсини. Вони продукуються деякими видами мікроскопічних цвілевих грибів пологів Penicillium, Aspergillus, зокрема А. ochraceus, P. viridicatum. Ці цвілеві гриби зустрічаються повсюдно, в основному в теплих і вологих умовах, викликаючи гниття винограду під час затяжних дощів. Охратоксини мають загальнотоксичну дію, вражають нирки, печінку, знижують продуктивність, мають ембріотоксичну, мутагенну та канцерогенну дію.

Міжнародне агентство з вивчення раку класифікував охратоксин як потенційне канцерогенна речовина і віднесла його до класу небезпеки 2В. При забрудненні харчових продуктів охратоксі-нами людина захворює балканської ендемічної нефропатією.

В виноробної продукції раніше знаходили пату -Лінії, а останнім часом з'явилася інформація про зміст охратоксінаА. Він забруднює зерно, овочі, плоди і продукти їх переробки, корми, солод, пиво, соки і вино.

Нами розроблений спосіб визначення охратоксину в виноградне вино методом тонкошарової хроматографії (ТШХ).

Тонкошарова хроматографія - різновид рідинної хроматографії в плоскому з одного боку шарі сорбенту, нанесеному на плоску тверду підкладку. Основні особливості ТШХ обумовлені рухом елюента (розчинника) по шару сорбенту за рахунок капілярних сил, що спрощує і полегшує проведення хроматографічного процесу. Застосування універсального сорбенту - силікагелю і відкритий шар забезпечують легкість нанесення проби, можливість одночасного аналізу декількох проб, простоту спостереження за процесом елюювання.

Тонкошарова хроматографія передбачає очищення і концентрування мікотоксинів. Для цього використовують двовимірну або ступінчасту хроматогра-

фию. Перший ступінь елюювання - очищення, відділення заважають визначенню речовин, другий ступінь - поділ мікотоксинів.

Аналіз проби вина методом ТШХ включає стадії підготовок проби, пластини, хроматографічної камери і елюента, а також концентрує патрона Діапак С16МТ; потім власне хроматографування, випаровування елюента з пластини, ідентифікацію, кількісну оцінку та документування.

Перевага методу полягає не тільки в його простоті, доступності, можливості застосування специфічних виявляють агентів, що підтверджують приналежність речовини до шуканого, менших вимогах, пропонованих до очищення екстрактів, а й в можливості визначення малих кількостей охраток-сина - межа виявлення складає 0,1 мкг / см3.

Для визначення мікотоксину охратоксину А у вині і виноматеріалах 10 см3 зразка пропускають через який концентрує патрон Діапак С16МТ, концентруючи пробу в 10 разів, і остаточно очищають 1 см3 ацетонітрилу. Отриманий екстракт в кількості 5 мкл і стандарт наносять на пластини для ТШХ і проводять хроматографічне розділення (елюювання) в підготовленій хроматографічної камері з відповідними елюентом. Найоптимальнішою для поділу мікотоксину виявилася система розчинників у вигляді изопропанола і аміаку. Вона досить летюча і має невелике значення коефіцієнта удержіва-

ня Rf на сорбенті. Плями мікотоксину проявляли, опромінюючи довгохвильовим (365 нм) ультрафіолетовим світлом. Під дією УФ-променів плями мікотоксину світяться зелено-блакитним світлом.

Ідентифікацію та кількісне визначення охратоксину проводили методом скануючої денсометріі на денситометрі Сорбфіл зі спеціалізованою програмою обробки результатів аналізу і розрахунку параметрів хроматограмм.

Використання денситометра робить метод ТШХ кількісним, порівнянним по роздільної здатності з ВЕРХ, зберігаючи, однак, всі переваги ТШХ.

Запропонована методика апробована на зразках вина з попереднім внесенням певних кількостей охратоксину. Метод дозволяє швидко і точно контролювати вміст охратоксину в виноробної продукції.

ЛІТЕРАТУРА

1. Кретова Л.ГЛунев Л. І. Мікотоксини. Забруднення продукції і аналітичний контроль. - М .: Агрпрогресс, 2000..

2. Матеріали асамблеї МОВВ. - Париж, 2000. - С. 57-59.

3. Керівництво по сучасній тонкошарової хроматограмі -фіі / Под ред. О.Г. Ларіонова // За матеріалами школи-семінару з тонкошарової хроматографії. - М., 1994.

Лабораторія технології виноробства

Надійшла 08.09.04 р

Н.Т. СІЮХОВА

Майкопський державний технологічний університет

В даний час серйозну увагу звернуто до питань забруднення сільськогосподарських культур токсичними речовинами різної природи, в тому числі пестицидами. Серед сільськогосподарських культур, найбільш оброблюваних хімічними засобами захисту від шкідників і хвороб, особливо виділяється виноградна лоза. Внаслідок багаторазових захисних обробок в кожному вегетаційного періоду виноградники вже давно прийнято вважати свого роду акумуляторами екологічно небезпечних хімікатів.

В їх число входять фосфорорганічні сполуки, які характеризуються підвищеною небезпекою накопичення на оброблюваних ділянках і лідирують за масштабами практичного застосування. Ці препарати накопичуються в клітинах рослини. Найбільш небезпечно і інтенсивно ними забруднюються ягоди, що в кінцевому рахунку позначається на якості і екологічної безпеки вироблюваної з винограду продукції. З урахуванням високої токсичності і стабільності фосфорорганічних сполук і їх метаболітів, визначення забруднення ними виноградної продукції має важливе науково-практичне значення.

На виробничих ділянках спеціалізованого господарства АФ «Фанагорія» (Темрюкский р-н) був проведений (1999-2002 рр.) Токсикологічний контроль винограду червоних сортів. Проби відбирали під час збирання врожаю, а аналіз продукції на вміст в ній залишкових кількостей хлор і фосфорорганічних інсектицидів проводився в акредитованій випробувальній токсикологічної лабораторії СКЗНІІСіВ. Принцип вибору виноградних ділянок для відбору проб грунтувався на тому, що урожай винограду, зібраний з них, використовувався для заводської переробки та приготування сухих червоних вин в мікровінцехе лабораторії переробки винограду СКЗНІІСіВ.

При плануванні експериментів з вивчення зі -зберігання токсичних речовин у винограді враховувався можливий вплив двох факторів, сумарно визначають прояв потенційної небезпеки надходження інсектицидів в обробляється виноград: надходження токсичних залишків з грунту насаджень і з самого рослини в результаті поточних сезонних обробок

Охратоксини виробляються деякими видами грибів Aspergillusі Penicillium. Основними продуцентами є A.ochraceusі P.viridicatum. Ці гриби зустрічаються повсюдно. Aspergillusвиробляє охратоксини при підвищеній температурі і вологості, а Penicilliumвже при 5 ° С. Охратоксини - з'єднання високої токсичності, з яскраво вираженим тератогенним ефектом.

Охратоксини А, В, і С є групою близьких за структурою сполук, що є ізокумарінамі, пов'язаними з Lфенілаланіну пептидного зв'язком. Залежно від природи радикалів утворюються охратоксини різних типів (табл. 2.3.).

Охратоксин А - безбарвна кристалічна речовина, слабо розчинна у воді, помірно розчинний в полярних органічних розчинниках (метанол, хлороформ), а також у водному розчині карбонату натрію. У хімічно чистому вигляді він нестабільний і дуже чутливий до впливу світла і повітря, проте в розчині етанолу може зберігатися без змін протягом тривалого часу. В УФ світлі володіє зеленою флуоресценцією.

Охратоксин В - кристалічна речовина, аналог охратоксину А, який не містить атом хлору. Він приблизно в 50 разів менш токсичний, ніж охратоксин А. В УФ-світлі володіє блакитний флуоресценції.

Охратоксин С - аморфна речовина, етиловий ефір охратоксину А, близький до нього за токсичністю, але в якості природного забруднювача харчових продуктів і кормів не розпізнаний. В У-світлі володіє блідо-зеленої флуоресценції.

Охратоксини належать до токсичних мікотоксинів, мають високу токсичність для печінки, нирок, тератогенні і імунодепресивними властивостями, вираженим гемолитическим ефектом. З охратоксин найбільш токсичний охратоксин А (ЛД 50 = 3,4 мг / кг, (одноденні курчата, перорально)). Він більш токсичний, ніж афлатоксини. Інші мікотоксини цієї групи на порядок менш токсичні.

Біохімічні, молекулярні, клітинні механізми дії охратоксин вивчені недостатньо. Відомо, що охратоксин А пригнічує синтез протеїну і метаболізм вуглеводів, зокрема гліконогеноз, шляхом пригнічення активності фенілаланін - т-РНК - специфічного ферменту, що грає ключову роль в початковій стадії синтезу протеїну.

Охратоксин А виявлений в кукурудзі, ячмені, пшениці, вівсі, ячмені. Важливий і небезпечний той факт, що при високому забрудненні кормового зерна і комбікормів охратоксин А виявляється у тваринницькій продукції (шинка, бекон, ковбаси). Охратоксин В зустрічається рідко. Охратоксини також вражають все плоди садово-городніх культур. Особливо сильно уражаються яблука: до 50% врожаю може забруднюватися мікотоксинами.

Слід зазначити, що охратоксини є стабільними сполуками. Так, наприклад, при тривалому прогріванні пшениці, забрудненої охратоксином А, його зміст знижувалося лише на 32% (при температурі 250-300ºС). Таким чином, распространненость в продуктах харчування, токсичність і стійкість охратоксин створюють реальну небезпеку для здоров'я людини.

методи аналізу

Охратоксин А міститься в окислених продуктах. Він легко розчиняється в багатьох органічних розчинниках, що використовується для екстракції. Найбільш часто використовується екстракція хлороформом і водним розчином фосфорної кислоти з наступним очищенням на колонці і кількісне визначення з використанням методу ТШХ.

Розроблено також метод ВЕРХ. Перед ВЕРХ аналізом зразок готують наступним чином. Подрібнений зразок обробляють сумішшю 2 М соляної кислоти і 0,4 М розчину хлориду магнію. Після гомогенізації екстрагують толуолом протягом 60 хв. Суміш центрифугують. Центрифугат пропускають через колонку з силікагелем і промивають сумішшю толуолу з ацетоном (рухома фаза). Охратоксин А елюіруются сумішшю толуолу з оцтовою кислотою (9: 1) і висушується при 40 ° С. Залишок розчиняють і фільтрують. Аналіз проводять з використанням ВЕРХ.

Крім того, розроблено низку біопроб на креветках, бактеріях, але отримані результати не дозволили використовувати ці методи для визначення охратоксин.



Грибами - продуцентами охратоксин - є гриби родів Aspergillus і Penicillium. Перші повідомлення про токсичність для качок продуктів життєдіяльності гриба A. ochraceus зроблені Скоттом в 1965 р У наступні роки було проведено велику кількість досліджень по виділенню в чистому вигляді продуктів життєдіяльності цього гриба, розшифровці хімічної структури виділених мікотоксинів, вивчення їх біологічної активності, умов токсінообразованія, методів визначення в різних біологічних субстратах. Охратоксини були названі по виду гриба - першого продуцента цього мікотоксину.

З культури гриба A. ochraceus виділено чотири охратоксину -А, В, С і D. Найбільше санітарно-токсикологічного значення має охратоксин А. Він добре розчиняється в ацетоні, бензолі, ацетонітрилі, хлороформі, спиртах. При взаємодії з заліза хлоридом утворює забарвлений в червоний колір комплекс, міцні комплекси - з лугами.

Основні гриби-продуценти охратоксин - гриби A. ochraceus і P. veridicatum. У країнах з теплим кліматом корми найбільш часто контаміновані охратоксином гриба A. ochraceus, в країнах помірного клімату - гриба P. veridicatum. Оптимальна температура субстрату, при якій йде найбільше токсінооб-разование при культивуванні, для грибів A. ochraceus 28 ° С і для грибів P. veridicatum 20 ° С.

За даними Н. В. Волкова (1980), з 316 ізолятів грибів, виділених в п'яти свинарських комплексах України, 106 штамів (33,5%) були віднесені до грибів A. ochraceus. З цієї кількості чотири ізоляту утворили охратоксин А.

Гриби - продуценти охратоксину А - досить часто виявляють в кормах в Росії, проте випадків захворювання тварин зареєстровано дуже мало. Це пов'язано з відсутністю чутливого і специфічного методу визначення охратоксину А в кормах. Останнім часом охратоксікоз А був встановлений в ряді свинарських господарств Курської і Бєлгородської областей (Г. П. Кононенко з співавт., 1999).

Охратоксини, так само як і інші мікотоксини, порівняно швидко руйнуються в організмі тварин. Однак є повідомлення, що микотоксин в залежності від дози може затримуватися в м'язовій тканині і в м'язах свиней до 2 тижнів, в печінці до 3 і в нирках до 4 тижнів. Тому необхідно встановити термін забою тварин після останнього випадку надходження мікотоксі-на в організм в 4 тижні. Не виключена також можливість виділення мікотоксину з молоком у разі надходження його в організм з кормами в порівняно великих кількостях.

Охратоксин А відноситься до високотоксичних сполук - ЛД5о для лабораторних тварин при одноразовому введенні всередину 20-28 мг / кг маси тварини, для курчат 7-денного віку 11 -15мт / кг. Мікотоксин має виражену кумуляцією. Найбільш чутливі до нього свині, особливо молоді, потім птиці.

При утриманні мікотоксину в кормах 0,2-0,4 мг / кг корму у свиней навіть при тривалому годуванні не відзначено клінічних ознак інтоксикації, але помічені зниження приросту маси тварин і поліурія. Для курчат субтоксіческая доза становить 0,6-0,8 мг / кг корму, токсична - 1,5-2,0 мг / кг. При збільшенні вмісту охратоксину А в кормах до 5 мг / кг у свиней і курчат були виражені ознаки отруєння і загибель окремих тварин.

Токсікодінамікі. Недостатньо з'ясована. Охратоксин А переважно діє на нирки, тому в Данії, де вперше був зареєстрований цей микотоксикозами у свиней, його назвали «мікотоксіческая нефропатія свиней». Встановлено, що охратоксини, потрапляючи в кров, порівняно швидко зв'язуються з її білками. Можливо, потрапляючи в кисле середовище нирок, микотоксин звільняється і проявляє своє нефропатія-чеський дію.

Клініка. Хронічний охратоксікоз, який частіше буває в практичних умовах, виявляється дуже слабо. У тварин зростає спрага, виражені поліурія, зниження приросту маси. У крові в деяких випадках відзначають лейкоцитоз, збільшення кількості лімфоцитів, зниження базофілів. У курчат спостерігають загальне пригнічення, скуйовджене пір'я, зниження продуктивності. За даними деяких авторів, на шкаралупі яєць з'являються жовті плями.

Лікування. Специфічних методів лікування немає. Перш за все з раціону слід виключити корми, що містять охратоксин А чи ж уражені пліснявою. Ефективно введення в корми різних адсорбентів, таких, як цеоліти, глауконіти і ін.

Патологоанатомічні зміни. Найбільш характерно при охратоксікозе ураження нирок. Як правило, вони збільшені, капсула місцями з'єднана з кірковим шаром. На розрізі кірковий шар блідий; під капсулою можуть бути кісти розміром 1 - 2 мм. При гістологічному дослідженні відзначають некроз клітин проксимальних канальців, розростання, сполучної тканини в кірковому шарі.

У черевній порожнині іноді знаходять підвищений вміст рідини. В окремих випадках збільшена печінка і некротичних змінені її клітини.

Ветсанекспертиза. При вимушеному забої тварин в разі охратоксікоза органи і тканини, і перш за все нирки, необхідно досліджувати на присутність мікотоксину. МДУ охратоксину в м'ясі і субпродуктах не встановлено. При виявленні залишків мікотоксину тушу і внутрішні органи утилізують.

Концентрація охратоксину А в пробі, мг / кг

Межі відносної похибки (показник точності) (± d),%, Р = 0,95

Стандартне відхилення повторюваності (s r), %

Межа повторюваності ( r), %

Повнота вилучення речовин,%

4.2. Допоміжне обладнання

Апарат для струшування проб типу АВУ-6С або аналогічний
Ротаційний випарник ІР-1М з пасткою або аналогічний
Електрошафа сушильна лабораторна з похибкою підтримки температури ± 2,5 в інтервалі від 50 до 350 ° С
холодильник побутової
Млин лабораторний електрична ЕМ-3А або аналогічна рН-метр	ТУ 46-22-236-79
Магнітна мішалка типу ММ 5 з перемішуючим стрижнем	ТУ 25-11.834-80
Колби плоскодонні конічні на 250 см3 з НШ 29, тип КнКШ 250-29 / 32	ГОСТ 10394-74
Флакони скляні загвинчуються з темного скла (Вайл), об'ємом 7 см3
Колби мірні, місткістю 100, 500, 1000 см3 тип 2-100-2,2-500-2
Вирви лабораторні
Колби грушоподібні на 10 см3 з НШ 14,5, тип ГрКШ-10-14 / 23	ГОСТ 10394-72

4.3. Реактиви та матеріали

. Підготовка до виконання вимірювань

5.1. Приготування стандартних розчинів охратоксину А

Для приготування стандартного розчину зберігання (концентрація охратоксину А - 10 нг / мкл) навішення кристалічного охратоксину А масою 5 мг поміщають в мірну колбу об'ємом 500 см3, доливають 50 см3 суміші толуол-оцтова кислота (98: 2% об.), Ретельно перемішують до повного розчинення речовини і доводять тієї ж сумішшю розчинників до мітки. Для встановлення точної концентрації розчину зберігання вимірюють його оптичну щільність при довжині хвилі 333 нм (Д333). Концентрацію розчину обчислюють за формулою:

Для приготування робочих розчинів охратоксину А з концентрацією 0,005; 0,05 і 0,1 нг / мкл відбирають відповідно 50, 500 і 1000 мкл розчину з концентрацією 0,5 нг / мкл, упарюють насухо і розчиняють в 5 см3 рухомої фази.

Розчин зберігання охратоксину А містять в скляному посуді з притертою пробкою в темному прохолодному місці (при температурі близько 0 ° С) до одного року і використовують для приготування робочих стандартних розчинів. Робочі стандартні розчини зберігають в Вайль з темного скла в темному прохолодному місці (при температурі близько 0 ° С) протягом 1 місяця.

Перед використанням робочих стандартних розчинів їх слід довести до кімнатної температури і тільки після цього слід відкривати пробки.

5.2. Приготування фосфатного буферного розчину, рН = 7,4

Наважку натрію фосфорнокислого двузамещенного 12-водного масою 1,15 г, навішування натрію однозамещенного 2-водного масою 0,124 г і навішення натрію хлориду масою 1,74 г переносять у мірну колбу місткістю 100 см3, додають 10 - 20 см3 дистильованої води. Перемішують і доводять об'єм розчину в колбі до мітки. Термін зберігання - 1 місяць в холодильнику.

5.3. Приготування сумішей розчинників

толуол-оцтова кислота (98:2 % про.).

У мірну колбу на 1000 см3 вносять 20 см3 оцтової кислоти і, перемішуючи, доводять толуолом до мітки. Термін зберігання - 1 місяць в темному прохолодному місці.

Ацетонитрил-вода (60:40 % про.).

У мірну колбу на 1000 см3 вносять 600 см3 ацетонітрилу і, перемішуючи, доводять водою до мітки. Термін зберігання - 1 місяць в темному прохолодному місці.

Ацетонитрил-вода (60:40 % про.; рН = 3 ,0 ).

У мірну колбу на 1000 см3 вносять 600 см3 ацетонітрилу і, перемішуючи, доводять бидистиллированной водою до мітки. Внесенням фосфорної кислоти підводять рН суміші до величини, рівної 3,0. Термін зберігання - 1 місяць в темному прохолодному місці.

метанол-оцтова кислота (98:2 % про.).

У мірну колбу на 1000 см3 вносять 20 см3 оцтової кислоти і, перемішуючи, доводять метанолом до мітки. Термін зберігання - 1 місяць в темному прохолодному місці.

. Відбір і підготовка проб для аналізу

6.1. Відбір проб

Для обліку специфіки відбору проб окремих видів продуктів слід керуватися діючою нормативно-технічною документацією:

«Зерно. Правила приймання і методи відбору проб »ГОСТ 13586.3-83;

«Крупа. Правила приймання і методи відбору проб »ГОСТ 26312.1-84;

«Борошно і висівки. Приймання і методи відбору проб »ГОСТ 27668-88;

«Продукти харчові консервовані. Відбір проб і підготовка їх до випробування »ГОСТ 8756.0-70.

Проби для аналізу, представницькі по концентрації мікотоксинів для всієї партії, слід відбирати з попередньо гомогенізоване середнього (вихідного) зразка масою 2 кг.

6.2. Підготовка проб для аналізу

Відібрані проби подрібнюють протягом 1 - 2 хв у лабораторному млині. При цьому використовують дві паралельні проби.

6.2.1. екстракція

Наважку 25 г подрібненої проби поміщають в плоскодонну конічну колбу на 250 см, додають 100 см3 суміші ацетонітрил-вода (60:40% об.). Екстрагують на апараті для струшування проб протягом 30 хв. Отриману суміш фільтрують через паперовий складчастий фільтр «синя стрічка». Відбирають 10 см3 фільтрату і додають 90 см фосфатного буферного розчину, рН = 7,4.

6.2.2. очищення екстракту

На імуноафінного колонку наносять 100 мл отриманої суміші зі швидкістю 1 - 2 краплі в секунду, промивають 20 см3 фосфатного буферного розчину, рН = 7,4. Охратоксин А елюіруют 3 см3 суміші метанол-оцтова кислота (98: 2% об.).

. виконання вимірювань

7.1. Приготування тестового зразка

Елюат упарюють досуха. Сухий залишок розчиняють в 400 мкл рухомої фази (розчин А).

7.2. умови хроматографування

Умови ВЕРХ: рухома фаза - ацетонітрил-вода (60:40% об .; рН = 3,0); швидкість рухомої фази - 1,5 см3 / хв.

Флуоріметріческій детектор встановлюють на довжину хвилі збуджуючого випромінювання 333 нм, на лінії емісії встановлюють емісійний фільтр з смугою пропускання 466 нм.

Для аналізу проб в інжектор хроматографа вводять за допомогою микрошприца 50 мкл тестового зразка (розчину А). При наявності піку, що збігається за часом утримування з охратоксином А, розраховують масу охратоксину А у вколов за допомогою градуювального графіка.

. Обробка результатів вимірювання

8.1. Побудова градуйованою залежності

Для побудови градуювального графіка проводять хроматографический аналіз серії робочих розчинів стандартів. У інжектор за допомогою микрошприца вводять 50 мкл робочого розчину стандарту з концентрацією 0,005 нг / мкл, що відповідає 0,25 нг охратоксину А. Подібне робиться для інших стандартних розчинів з концентраціями 0,05 і 0,10 нг / мкл, що в свою чергу відповідає 2,5 і 5,0 нг охратоксину А у вколов. У зазначених умовах час утримування знаходиться для охратоксину А в діапазоні від 4 до 5 хв. На підставі отриманих даних будують градуйований графік (залежність площі хроматографічного піку від маси охратоксину А у вколов).

Результат аналізу представляють у вигляді (при ймовірності Р = 0,95):

D - межа абсолютної похибки:

d - межа відносної похибки методики (показник точності),% (табл. 1).

* 0,0001 мг / кг - межа виявлення.

. Вимоги до кваліфікації виконавця

До виконання аналізу охратоксину А в зерні і зернопродуктах допускаються особи зі спеціальним вищою освітою або середньою спеціальною освітою, які володіють технікою ВЕРХ-аналізу, що пройшли відповідну підготовку і мають досвід роботи в хімічній лабораторії.

. Умови виконання вимірювань

Температура навколишнього повітря від 15 до 25 ° С.

Відносна вологість повітря не більше 80% при 25 ° С.

Атмосферний тиск 730 - 760 мм рт.ст.

Напруга електроживлення: 210 - 220 В. Частота змінного струму: 45 - 50 Гц.