pliant

Truse și sisteme de testare pentru imunotestul enzimatic. Sunt disponibile comercial în conformitate cu ISO 9000 complet cu reactivii necesari și sunt concepute pentru determinarea cantitativă a ochratoxinei în cereale, furaje, produse din cereale, bere și ser de sânge. Instrucțiuni privind utilizarea sistemelor de testare RIDASCREEN® FAST Ochratoxin Ași RIDASCREEN® Ochratoxin A aprobat de Departamentul de Medicină Veterinară al Agenției Federale pentru agricultură Ministerul Agriculturii al Rusiei sub numărul MUK 5-1-14/1001. Sistemele sunt incluse în „Lista documentației normative permise pentru utilizare în laboratoarele veterinare de stat în diagnosticarea bolilor animalelor, peștilor, albinelor, precum și în monitorizarea siguranței materiilor prime de origine animală și vegetală”. Sisteme de testare RIDASCREEN® FAST Ochratoxin A corespund GOST 34108-2017"Hranaj, furaje mixte, materii prime furajere mixte. Determinarea conținutului de micotoxine prin imunotest enzimatic competitiv direct în fază solidă".

Determinarea ocratoxinei A în cereale, furaje, produse din cereale, bere și ser sanguin

Ochratoxina este o substanță otrăvitoare formată ca urmare a activității vitale a ciupercilor de mucegai din gen Aspergillusși Penicillium. Alături de nefrotoxicitate pronunțată, ocratoxina are proprietăți hepatotoxice, teratogene, cancerigene și imunosupresoare. Cu produse de origine vegetală și animală, ocratoxina poate pătrunde în corpul uman. Se găsește nu numai în cereale (13% din probele pozitive) și hrana animalelor, ci și în sângele de porc (60% din probele pozitive) și rinichi (21% din probele pozitive).

Reglementările tehnice ale Uniunii Vamale TR CU 021/2011 „Cu privire la siguranța alimentelor” reglați următorul nivel maxim de conținut de ochratoxină A: în boabe alimentare, cereale, făină - 0,005 mg/kg (5 μg/kg); în alimente pentru bebeluși, produse alimentare pentru preșcolari și școlari, produse alimentare pentru femeile însărcinate și care alăptează - nu sunt permise (<0,0005 мг/кг).

Proiect de lege federală № 349084-5 „Regulamentul Tehnic pentru Produsele Vitivinicole” stabilește cerințe pentru conținutul de ochratoxină A în vin de cel mult 0,002 mg/l.

Proiectul de lege federală „Cu privire la cerințele pentru siguranța produselor alimentare și a proceselor de producție, depozitare, transport, vânzare și eliminare” include, de asemenea, o cerință pentru controlul obligatoriu al cerealelor alimentare pentru ochratoxina A, al cărei conținut nu trebuie să depășească 0,005 mg. /kg. Reglementările legale în vigoare pot fi găsite pe site compact24.com.

Până de curând, metodele cromatografice (cromatografie lichidă de înaltă performanță, cromatografia în strat subțire) au fost utilizate în mod predominant pentru controlul ocratoxinei. Metodă mult mai convenabilă de testare imunosorbantă legată de enzime (ELISA sau ELISA), care are o sensibilitate foarte mare.

Specificație:	RIDASCREEN® FAST Ochratoxin A	RIDASCREEN® Ochratoxin A 30/15
Format:	Placă de bandă, 48 de godeuri (6 benzi din 8 godeuri)	Placă de bandă, 96 godeuri (12 benzi din 8 godeuri)
Standarde:	0 / 5 / 10 / 20 / 40 µg/l	0 / 50 / 100 / 300 / 900 / 1800 ng/l
Pregătirea unei mostre:	Măcinarea probei, extracția, filtrarea	extracție, centrifugare/filtrare (cereale, furaje); extracție, centrifugare, filtrare, agitare, supraextracție, centrifugare, evaporare (bere/ser)
Timp petrecut:
Limita de detectare:	0,005 mg/kg	0,001250 mg/kg (cereale, furaje) 0,000050 mg/kg (bere, ser de sânge)

Produse asemanatoare:

se toarnă o suprapunere, iar în partea din mijloc - două suprapuneri cu un pas minim între ele, care indică limitele ramurilor de intrare și de ieșire ale benzii. Pasul dintre suprapunerile pe ramura care se apropie a benzii este determinat folosind dependența unei progresii aritmetice, iar pe ramura descendentă - pe baza unei progresii geometrice. În acest caz, primul membru al progresiei aritmetice trebuie să fie setat și să țină cont de faptul că ultimul decalaj dintre căptușelile ramului care se apropie a benzii este primul membru al progresiei geometrice, iar diferența și numitorul progresiilor sunt determinată din decalajul total dintre căptușelile fiecărei ramuri a benzii.

Într-o frână tambur-saboți, nivelarea sarcinilor specifice se realizează prin plasarea într-un saboți de frână cu mai multe secțiuni pe părțile sale de intrare și de ieșire a garniturilor mobile radiale interconectate printr-un echilibrator, adică se utilizează principiul greutăților obișnuite. Această soluție tehnică este protejată de un certificat de drept de autor pentru o invenție.

Stabilizarea temperaturilor de suprafață în perechile de frecare ale dispozitivelor de frânare menționate mai sus se realizează datorită efectului termoelectric folosind termopilele care funcționează în modurile unui frigider termoelectric și a unui generator termoelectric în căptușelile ramurilor de intrare și de ieșire ale benzii, ca precum și în secțiunile de intrare și de ieșire ale căptușelilor de frecare ale pantofului în servofrânele principale și suplimentare, în funcție de sarcina termică, nodurile lor de frecare. În același timp, este furnizat

redistribuirea energiei termice între suprafețele unităților de frecare ale frânelor, ceea ce duce la cvasistabilizarea acesteia. Funcționarea termopilelor în modurile de mai sus este fundamentată teoretic.

Se are în vedere controlul rațional al modurilor de funcționare a unei frâne cu sabot cu bandă, cu condiția ca nivelul de încărcare termică a straturilor de suprafață ale garniturilor de frecare să nu depășească temperatura admisă pentru materialele acestora. Pentru a implementa controlul modurilor de frânare, poate fi utilizată răcirea combinată (termoelectrică cu conductă termică) a perechilor de frecare a frânei.

Ca urmare a aplicării acestei soluții tehnice, s-a obținut o creștere a eficienței frânei bandă-sabot de troliu U2-5-5.

Astfel, sunt indicate modalitățile de control al încărcării dinamice și termice a unităților de frecare ale dispozitivelor de frânare.

LITERATURĂ

1. Declaratie Pat. 63418А (Ucraina). O metodă pentru controlul sarcinilor specifice pe ramurile de intrare și de ieșire ale benzii de frână a unei frâne cu banda-saboți / A.I. Volcenko, V.V. Dyachuk, N.A. Volchenko și alții - B.I. - 2004. - Nr. 1. - În ucraineană. lang.

2. A.s. 1682675 A1 URSS. Frână tambur-saboți / A.I. Volcenko, V.V. Moskalev, P.A. Skorokhod și alții - B. I. - 1991. -

3. Pat. 2221944 C1 Rusia. Sisteme de răcire pentru un mecanism de frânare cu acțiune servo și o metodă de implementare a acestuia / A.I. Volcenko, A.A. Petrik, N.A. Volcenko și alții - B.I. - 2004. - Nr. 2.

Departamentul de Mecanica Tehnica

Primit 22.11.04

DETERMINAREA OCRATOXINEI A ÎN VINUL DE STRUGURI

E.N. RIKUNOVA, T.I. GUGUCHKINA

Institutul de Cercetare Zonal de Horticultură și Viticultură din Caucazia de Nord

Printre micotoxine, toxinele ocru ocupă un loc aparte. Sunt produse de unele specii de ciuperci microscopice din genurile Penicillium, Aspergillus, în special A. ochraceus, P. viridicatum. Aceste mucegaiuri sunt omniprezente, mai ales în condiții calde și umede, provocând putrezirea strugurilor în timpul ploilor prelungite. Ochratoxinele au un efect toxic general, afectează rinichii, ficatul, reduc productivitatea, au efecte embriotoxice, mutagene și cancerigene.

Agenția Internațională de Cercetare a Cancerului a clasificat ocratoxina ca un potențial cancerigen și a clasificat-o ca o clasa de pericol 2B. Când alimentele sunt contaminate cu ochratoxine, o persoană se îmbolnăvește de nefropatie endemică balcanică.

Patu-lin a fost găsit anterior în produsele vinicole, iar recent au apărut informații despre conținutul de ochratoxină A. Contamina cerealele, legumele, fructele și produsele acestora, furajele, malțul, berea, sucuri și vinul.

Am dezvoltat o metodă pentru determinarea ocratoxinei în vinul de struguri prin cromatografie în strat subțire (TLC).

Cromatografia în strat subțire este un tip de cromatografie lichidă într-un strat de sorbant care este plat pe o parte și depus pe un substrat solid plat. Principalele caracteristici ale TLC se datorează deplasării eluentului (solventului) peste stratul de sorbent datorită forțelor capilare, ceea ce simplifică și facilitează procesul cromatografic. Utilizarea unui sorbent universal - silicagel și a unui strat deschis oferă ușurință în aplicarea probei, posibilitatea analizei simultane a mai multor probe și ușurința monitorizării procesului de eluare.

Cromatografia în strat subțire implică purificarea și concentrarea micotoxinelor. Pentru aceasta se folosește cromatografia bidimensională sau în etape.

fiu. Prima etapă de eluare este purificarea, separarea substanțelor interferente, a doua etapă este separarea micotoxinelor.

Analiza unei probe de vin prin TLC include etapele de preparare a unei probe, a unei plăci, a unei camere cromatografice și a eluanților, precum și a unui cartuş de concentrare Diapak C16MT; apoi cromatografia propriu-zisă, evaporarea eluentului din placă, identificarea, cuantificarea și documentarea.

Avantajul metodei nu este doar simplitatea, accesibilitatea, posibilitatea utilizării agenților de dezvoltare specifici, confirmând că substanța aparține celei dorite, cerințe mai mici pentru purificarea extractelor, ci și posibilitatea de a determina cantități mici de ochratoxină - limita de detecție este de 0,1 μg/cm3.

Pentru determinarea micotoxinei ocratoxina A din vin și materiale vinicole, 10 cm3 de probă sunt trecute prin cartuşul de concentrare Diapak C16MT, concentrându-se proba de 10 ori, iar în final se purifică cu 1 cm3 de acetonitril. Extractul rezultat în cantitate de 5 μl și standardul sunt aplicate pe plăci TLC și separarea cromatografică (eluția) se efectuează într-o cameră cromatografică pregătită cu eluanți corespunzători. Sistemul de solvenți sub formă de izopropanol și amoniac s-a dovedit a fi cel mai optim pentru separarea micotoxinei. Este destul de volatil și are un coeficient de retenție scăzut.

Rf pe sorbant. Petele de micotoxină au fost dezvoltate prin iradierea cu lumină ultravioletă cu lungime de undă lungă (365 nm). Când sunt expuse la razele UV, petele de micotoxine strălucesc albastru-verde.

Identificarea și determinarea cantitativă a ocratoxinei a fost efectuată prin scanarea densometriei pe un densitometru Sorbfil cu un program specializat pentru prelucrarea rezultatelor analizei și calcularea parametrilor cromatogramei.

Utilizarea unui densitometru face ca metoda TLC să fie cantitativă, comparabilă ca rezoluție cu HPLC, păstrând în același timp toate avantajele TLC.

Metoda propusă a fost testată pe mostre de vin cu introducerea prealabilă a anumitor cantități de ochratoxină. Metoda vă permite să controlați rapid și precis conținutul de ochratoxină din produsele vinicole.

LITERATURĂ

1. Kretova L. Glunev L. I. Micotoxine. Contaminarea produselor și control analitic. - M.: Agrprogress, 2000.

2. Procesele Adunării OIM. - Paris, 2000. - S. 57-59.

3. Ghid pentru cromatografia modernă în strat subțire / Ed. O.G. Larionova // Pe baza materialelor seminarului-școală de cromatografie în strat subțire. - M., 1994.

Laborator de tehnologie vinificatoare

Primit 08.09.04

N.T. SIYUKHOVA

Universitatea Tehnologică de Stat Maykop

În prezent, se acordă o atenție deosebită problemelor de contaminare a culturilor agricole cu substanțe toxice de diferite naturi, inclusiv pesticide. Dintre culturile cele mai tratate cu mijloace chimice de protecție împotriva dăunătorilor și bolilor se remarcă vița de vie. Datorită tratamentelor de protecție repetate în fiecare sezon de vegetație, podgoriile au fost considerate mult timp un fel de acumulator de substanțe chimice periculoase pentru mediu.

Printre acestea se numără compușii organofosforici, care se caracterizează printr-un risc crescut de acumulare în zonele cultivate și sunt lideri în ceea ce privește aplicarea practică. Aceste medicamente se acumulează în celulele vegetale. Boabele sunt cel mai periculos și intens contaminate cu acestea, ceea ce afectează în cele din urmă calitatea și siguranța mediului înconjurător a produselor produse din struguri. Ținând cont de toxicitatea și stabilitatea ridicată a compușilor organofosforici și a metaboliților acestora, determinarea contaminării produselor din struguri de către aceștia are o mare importanță științifică și practică.

Pe locurile de producție ale fermei specializate AF „Fanagoria” (raionul Temryuk) a fost efectuat (1999-2002) controlul toxicologic al soiurilor de struguri roșii. S-au prelevat probe în timpul recoltării, iar analiza produselor pentru conținutul cantităților reziduale de insecticide organoclorurate și fosforice a fost efectuată într-un laborator toxicologic de testare acreditat al SKZNIISiV. Principiul selecției parcelelor de struguri pentru prelevare s-a bazat pe faptul că recolta de struguri colectată din acestea a fost folosită pentru prelucrarea în fabrică și prepararea vinurilor roșii seci în micro-vinoteca din laboratorul de prelucrare a strugurilor din SKZNIISiV.

La planificarea experimentelor de studiere a reținerii substanțelor toxice în struguri, s-a ținut cont de posibila influență a doi factori, care împreună determină manifestarea pericolului potențial de intrare a insecticidelor în strugurii cultivați: pătrunderea reziduurilor toxice din solul plantațiilor și din planta propriu-zisă ca urmare a tratamentelor sezoniere curente

Ochratoxinele sunt produse de anumite tipuri de ciuperci. Aspergillusși Penicillium. Principalii producători sunt A.ochraceusși P. viridicatum. Aceste ciuperci se găsesc peste tot. Aspergillus produce ocratoxine la temperatură și umiditate ridicate și Penicillium deja la 5°C. Ochratoxinele sunt compuși foarte toxici cu un efect teratogen pronunțat.

Ocratoxinele A, B și C sunt un grup de compuși înrudiți structural care sunt izocumarine asociate cu L-legatura peptidica fenilalanina. În funcție de natura radicalilor, se formează diferite tipuri de ochratoxine (Tabelul 2.3.).

Ochratoxina A este o substanță cristalină incoloră, ușor solubilă în apă, moderat solubilă în solvenți organici polari (metanol, cloroform), precum și într-o soluție apoasă de carbonat de sodiu. Într-o formă chimic pură, este instabilă și foarte sensibilă la lumină și aer, dar într-o soluție de etanol poate rămâne neschimbată mult timp. În lumina UV are fluorescență verde.

Ochratoxina B este o substanță cristalină, un analog al ochratoxinei A, care nu conține un atom de clor. Este de aproximativ 50 de ori mai puțin toxic decât ochratoxina A. În lumina UV, are fluorescență albastră.

Ochratoxina C este o substanță amorfă, esterul etilic al ocratoxinei A, care este aproape de aceasta ca toxicitate, dar nu a fost găsită ca contaminant natural pentru alimente și furaje. În lumina Y are o fluorescență verde pal.

Ochratoxinele aparțin micotoxinelor toxice, au toxicitate ridicată pentru ficat, rinichi, proprietăți teratogene și imunosupresoare și un efect hemolitic pronunțat. Dintre ochratoxine, ochratoxina A este cea mai toxică (DL 50 = 3,4 mg/kg, (pui de o zi, oral)). Este mai toxic decât aflatoxinele. Alte micotoxine din acest grup sunt cu un ordin de mărime mai puțin toxice.

Mecanismele biochimice, moleculare, celulare de acțiune a ocratoxinelor nu sunt bine înțelese. Se știe că ocratoxina A inhibă sinteza proteinelor și metabolismul carbohidraților, în special glicogenoza, prin inhibarea activității fenilalaninei, un ARNt, o enzimă specifică care joacă un rol cheie în stadiul inițial al sintezei proteinelor.

Ochratoxina A se găsește în porumb, orz, grâu, ovăz și orz. Este important și periculos ca ochratoxina A să se găsească în produsele zootehnice (șuncă, slănină, cârnați) la o contaminare ridicată a cerealelor furajere și a hranei pentru animale. Ochratoxina B este rară. Ochratoxinele afectează, de asemenea, toate fructele culturilor horticole. Merele sunt afectate în special: până la 50% din recoltă poate fi contaminată cu micotoxine.

Trebuie remarcat faptul că ochratoxinele sunt compuși stabili. Deci, de exemplu, în timpul încălzirii prelungite a grâului contaminat cu ochratoxină A, conținutul acestuia a scăzut doar cu 32% (la o temperatură de 250-300ºС). Astfel, prevalența în produsele alimentare, toxicitatea și persistența ocratoxinelor creează un real pericol pentru sănătatea umană.

Metode de analiză

Ocratoxina A se găsește în alimentele oxidate. Se dizolvă ușor în mulți solvenți organici, care sunt utilizați pentru extracție. Cel mai frecvent utilizat este extracția cu cloroform și o soluție apoasă de acid fosforic, urmată de purificarea pe coloană și determinarea cantitativă prin metoda TLC.

De asemenea, a fost dezvoltată o metodă HPLC. Înainte de analiza HPLC, proba este pregătită după cum urmează. Proba zdrobită este tratată cu un amestec de acid clorhidric 2 M și soluție de clorură de magneziu 0,4 M. După omogenizare, se extrage cu toluen timp de 60 de minute. Amestecul este centrifugat. Centrifuga este trecută printr-o coloană de silicagel și spălată cu un amestec de toluen și acetonă (fază mobilă). Ochratoxina A este eluată cu un amestec de toluen și acid acetic (9:1) și uscată la 40°C. Reziduul este dizolvat și filtrat. Analiza este efectuată folosind HPLC.

În plus, au fost dezvoltate o serie de biotestări asupra creveților și bacteriilor, dar rezultatele obținute nu au permis utilizarea acestor metode pentru determinarea ocratoxinelor.



Ciupercile - producătoare de ochratoxine - sunt ciuperci din genurile Aspergillus și Penicillium. Primele rapoarte privind toxicitatea pentru rațe a deșeurilor ciupercii A. ochraceus au fost făcute de Scott în 1965. În anii următori, au fost efectuate un număr mare de studii pentru a izola deșeurile acestei ciuperci în formă pură, pentru a descifrarea structurii chimice a micotoxinelor izolate, studierea activității lor biologice, condițiile de formare a toxinelor, metode de determinare în diverse substraturi biologice. Ochratoxinele au fost numite după tipul de ciupercă care a fost primul producător al acestei micotoxine.

Din cultura ciupercii A. ochraceus au fost izolate patru ochratoxine - A, B, C și D. Ochratoxina A are cea mai mare semnificație sanitară și toxicologică. Se dizolvă bine în acetonă, benzen, acetonitril, cloroform și alcooli. Când interacționează cu clorura de fier, formează un complex de culoare roșie, complexe puternice cu alcalii.

Principalele ciuperci producătoare de ochratoxine sunt A. ochraceus și P. veridicatum. În țările cu climă caldă, furajele sunt cel mai adesea contaminate cu ochratoxină de la ciuperca A. ochraceus, în țările cu climă temperată - de la ciuperca P. veridicatum. Temperatura optimă a substratului, la care are loc cea mai mare formare de toxine în timpul cultivării, este de 28 °С pentru ciupercile A. ochraceus și 20 °С pentru ciupercile P. veridicatum.

Conform lui N. V. Volkov (1980), din 316 izolate fungice izolate în cinci complexe de creștere a porcilor din Ucraina, 106 tulpini (33,5%) au fost atribuite fungilor A. ochraceus. Din această cantitate, patru izolate au format ocratoxina A.

Ciupercile - producători de ochratoxină A - se găsesc adesea în furaje în Rusia, dar au fost înregistrate foarte puține cazuri de boli ale animalelor. Acest lucru se datorează lipsei unei metode sensibile și specifice pentru determinarea ocratoxinei A în furaje. Recent, ocratoxicoza A a fost stabilită într-un număr de ferme de porci din regiunile Kursk și Belgorod (GP Kononenko și colab., 1999).

Ocratoxinele, ca și alte micotoxine, sunt distruse relativ rapid în corpul animalelor. Cu toate acestea, există rapoarte că, în funcție de doză, micotoxina poate fi reținută în țesutul muscular și în mușchii porcilor timp de până la 2 săptămâni, în ficat până la 3 săptămâni și în rinichi până la 4 săptămâni. Prin urmare, este necesar să se stabilească perioada de sacrificare a animalelor după ultimul caz de aport de micotoxine în organism la 4 săptămâni. De asemenea, este posibil ca micotoxina să fie eliberată cu lapte dacă aceasta pătrunde în organism cu furaje în cantități relativ mari.

Ochratoxina A se referă la compuși foarte toxici - DL50 pentru animalele de laborator cu o singură administrare orală de 20-28 mg/kg greutate animală, pentru puii de 7 zile 11-15 mt/kg. Micotoxina are un cumul pronunțat. Cei mai sensibili la aceasta sunt porcii, mai ales cei tineri, apoi pasarile.

Când conținutul de micotoxină în furaj este de 0,2-0,4 mg/kg de hrană la porci, chiar și cu hrănirea prelungită, nu s-au observat semne clinice de intoxicație, dar s-a observat o scădere a creșterii în greutate și a poliuriei. La pui, doza subtoxică este de 0,6-0,8 mg/kg hrană, doza toxică este de 1,5-2,0 mg/kg. Odată cu o creștere a conținutului de ochratoxină A în furaje cu până la 5 mg/kg, semnele de otrăvire și moartea animalelor individuale au fost exprimate la porci și găini.

Toxicodinamica. Nu suficient de clar. Ocratoxina A acționează predominant asupra rinichilor, așa că în Danemarca, unde această micotoxicoză a fost semnalată pentru prima dată la porci, a fost numită „nefropatie micotoxică porcină”. S-a stabilit că ochratoxinele, care intră în sânge, se leagă relativ rapid de proteinele sale. Poate că, intrând în mediul acid al rinichilor, micotoxina este eliberată și își arată efectul nefropatic.

Clinica. Ocratoxicoza cronică, care apare mai des în condiții practice, se manifestă foarte slab. La animale, setea crește, se exprimă poliuria și o scădere a creșterii în greutate. În sânge, în unele cazuri, se observă leucocitoză, o creștere a numărului de limfocite și o scădere a bazofilelor. La pui, se observă opresiune generală, pene ciufulite și o scădere a productivității. Potrivit unor autori, pe coaja ouă apar pete galbene.

Tratament. Nu există tratamente specifice. În primul rând, alimentele care conțin ochratoxină A sau care sunt afectate de mucegai ar trebui excluse din dietă. Este eficientă introducerea diverșilor adsorbanți în furaje, cum ar fi zeoliți, glauconiți etc.

modificări patologice. Cea mai caracteristică a ochratoxicozei este afectarea rinichilor. De regulă, acestea sunt mărite, capsula este uneori conectată la stratul cortical. Pe secțiune, stratul cortical este palid; sub capsulă pot exista chisturi de 1-2 mm. Examenul histologic a remarcat necroza celulelor tubilor proximali, creșterea, țesutul conjunctiv în stratul cortical.

În cavitatea abdominală găsiți uneori un conținut crescut de lichid. În unele cazuri, ficatul este mărit și celulele sale sunt modificate necrotic.

Vetsanekspertiza. În cazul sacrificării forțate a animalelor în cazul ocratoxicozei, organele și țesuturile, în special rinichii, trebuie examinate pentru prezența micotoxinei. LMR pentru ochratoxină din carne și organe organice nu a fost stabilită. Dacă se găsesc reziduuri de micotoxine, carcasa și organele interne sunt eliminate.

Concentrația ochratoxinei A în probă, mg/kg

Limite de eroare relativă (indice de precizie) (±d), %, R = 0,95

Abaterea standard de repetabilitate (art r), %

Limita de repetabilitate ( r), %

Completitudinea extracției substanțelor, %

4.2. Echipament auxiliar

Aparat pentru agitarea probelor tip АВУ-6С sau similar
Evaporator rotativ IR-1M cu sifon sau similar
Dulap de uscare de laborator cu eroare de menținere a temperaturii ±2,5 în intervalul de la 50 la 350 °C
Frigider de uz casnic
Moara electrica de laborator EM-3A sau pH-metru similar	TU 46-22-236-79
Agitator magnetic tip MM 5 cu bara de agitare	TU 25-11.834-80
Baloane conice cu fund plat 250 cm3 cu NSh 29, tip KnKSh 250-29/32	GOST 10394-74
Sticle de sticlă închisă cu șurub (vile), 7 cmc
Baloane cotate, capacitate 100, 500, 1000 cm3 tip 2-100-2,2-500-2
Laborator de pâlnii
Baloane în formă de para, 10 cmc, cu NSh 14,5, tip GrKSh-10-14/23	GOST 10394-72

4.3. Reactivi si materiale

. Pregătirea pentru a face măsurători

5.1. Prepararea soluțiilor standard de ochratoxină A

Pentru a prepara o soluție standard de depozitare (concentrația de ochratoxină A este de 10 ng/µl), o probă de 5 mg de ochratoxină A cristalină este plasată într-un balon cotat cu un volum de 500 cm3, 50 cm3 dintr-un amestec de toluen-acid acetic (98:2% vol.) se adaugă, se amestecă bine până la dizolvarea completă a substanței și se aduce același amestec de solvenți la semn. Pentru a stabili concentrația exactă a soluției de stocare, densitatea sa optică este măsurată la o lungime de undă de 333 nm (D333). Concentrația soluției se calculează cu formula:

Pentru prepararea soluțiilor de lucru de ochratoxină A cu o concentrație de 0,005; Se iau 0,05 şi respectiv 0,1 ng/pl, 50, 500 şi 1000 pl dintr-o soluţie cu o concentraţie de 0,5 ng/pl, se evaporă la sec şi se dizolvă în 5 cm3 de faza mobilă.

Soluția de depozitare a ochratoxinei A se păstrează într-un recipient de sticlă cu dop măcinat într-un loc întunecat și răcoros (la o temperatură de aproximativ 0 ° C) timp de până la un an și este utilizată pentru a pregăti soluții standard de lucru. Soluțiile standard de lucru sunt păstrate în flacoane de sticlă închisă la culoare într-un loc întunecat și răcoros (la o temperatură de aproximativ 0 °C) timp de 1 lună.

Înainte de a utiliza soluții standard de lucru, acestea trebuie aduse la temperatura camerei și numai apoi trebuie deschise dopurile.

5.2. Prepararea soluției tampon fosfat, pH = 7,4

Se transferă la o cântărire de 1,15 g de fosfat de sodiu disubstituit 12-apos cu o masă de 1,15 g, o cântărire de sodiu de sodiu 2-apos disubstituit cu o masă de 0,124 g și o cântărire de clorură de sodiu cu o masă de 1,74 g. se adaugă un balon cotat cu o capacitate de 100 cm3, se adaugă 10 - 20 cm3 apă distilată. Se amestecă și se aduce volumul soluției din balon la semn. Perioada de valabilitate - 1 lună la frigider.

5.3. Prepararea amestecurilor de solvenți

Toluen-acetic acid (98:2 % despre.).

Se adaugă 20 cm3 de acid acetic într-un balon cotat de 1000 cm3 și, în timp ce se agită, se completează până la semn cu toluen. Perioada de valabilitate - 1 lună într-un loc răcoros.

Acetonitril-apă (60:40 % despre.).

Se adaugă 600 cm3 de acetonitril într-un balon cotat de 1000 cm3 și, în timp ce se agită, se completează până la semn cu apă. Perioada de valabilitate - 1 lună într-un loc răcoros.

Acetonitril-apă (60:40 % despre.; pH = 3 ,0 ).

Se adaugă 600 cm3 de acetonitril într-un balon cotat de 1000 cm3 și, în timp ce se agită, se completează până la semn cu apă bidistilată. Prin adăugarea de acid fosforic, pH-ul amestecului este ajustat la o valoare egală cu 3,0. Perioada de valabilitate - 1 lună într-un loc răcoros.

metanol-acetic acid (98:2 % despre.).

Se adaugă 20 cm3 de acid acetic într-un balon cotat de 1000 cm3 și, în timp ce se agită, se completează până la semn cu metanol. Perioada de valabilitate - 1 lună într-un loc răcoros.

. Prelevarea si pregatirea probelor pentru analiza

6.1. Selectarea eșantionului

Pentru a ține cont de specificul eșantionării anumitor tipuri de produse, ar trebui să ne ghidăm după documentația de reglementare și tehnică actuală:

"Porumb. Reguli de acceptare și metode de eșantionare” GOST 13586.3-83;

„Krupa. Reguli de acceptare și metode de eșantionare” GOST 26312.1-84;

„Făină și tărâțe. Metode de acceptare și eșantionare” GOST 27668-88;

„Produse alimentare conservate. Eșantionarea și pregătirea lor pentru testare” GOST 8756.0-70.

Probele pentru analiză, reprezentative pentru concentrația de micotoxine pentru întregul lot, trebuie prelevate dintr-o probă medie (inițială) pre-omogenizată cu o greutate de 2 kg.

6.2. Pregătirea probei pentru analiză

Probele selectate sunt zdrobite timp de 1 - 2 min într-o moară de laborator. În acest caz, sunt utilizate două mostre paralele.

6.2.1. Extracţie

O porţie de 25 g din proba mărunţită este plasată într-un balon conic cu fund plat de 250 cm, se adaugă 100 cm3 dintr-un amestec de acetonitril-apă (60:40% în volum). Se extrage pe un agitator timp de 30 de minute. Amestecul rezultat este filtrat printr-un filtru de hârtie plisată cu bandă albastră. Se extrag 10 ml din filtrat și se adaugă 90 ml soluție tampon fosfat, pH = 7,4.

6.2.2. Purificarea extractului

100 ml din amestecul rezultat se aplică pe coloana de imunoafinitate cu o viteză de 1-2 picături pe secundă, se spală cu 20 cm3 de soluție tampon fosfat, pH = 7,4. Ochratoxina A se eluează cu 3 cm3 de acid metanol-acetic (98:2% în volum).

. Preluarea măsurătorilor

7.1. Pregătirea probei de testare

Eluatul este evaporat la sec. Reziduul uscat se dizolvă în 400 μl de fază mobilă (soluția A).

7.2. Condiții de cromatografie

Condiții HPLC: fază mobilă - acetonitril-apă (60:40% vol.; pH = 3,0); viteza de fază mobilă - 1,5 cm3/min.

Detectorul fluorimetric este setat la o lungime de undă a radiației excitante de 333 nm, un filtru de emisie cu o lățime de bandă de 466 nm este instalat pe linia de emisie.

Pentru analiza probei, se injectează 50 μl din proba de testat (soluția A) în injectorul cromatograf folosind o microseringă. În prezența unui vârf care coincide cu timpul de retenție al ochratoxinei A, masa ochratoxinei A din injecție este calculată folosind o curbă de calibrare.

. Prelucrarea rezultatelor măsurătorilor

8.1. Construirea unei dependențe gradate

Pentru a construi un grafic de calibrare, se efectuează o analiză cromatografică a unei serii de soluții de lucru ale standardelor. Folosind o microseringă, se injectează în injector 50 µl din soluția standard de lucru cu o concentrație de 0,005 ng/µl, ceea ce corespunde la 0,25 ng de ochratoxină A. Același lucru se procedează pentru alte soluții standard cu concentrații de 0,05 și 0,10 ng/ µl, care la rândul său corespunde la 2,5 și 5,0 ng de ochratoxină A per injecție. În aceste condiții, timpul de retenție pentru ochratoxina A este în intervalul de la 4 la 5 minute. Pe baza datelor obținute, se construiește un grafic de calibrare (dependența zonei vârfului cromatografic de masa ochratoxinei A din injecție).

Rezultatul analizei este prezentat sub formă (cu o probabilitate R = 0,95):

D - limita absolută de eroare:

d este limita erorii relative a tehnicii (indicele de precizie), % (Tabelul 1).

* 0,0001 mg/kg - limita de detecție.

. Cerințe de calificare a interpretului

Pentru efectuarea analizei ochratoxinei A în cereale și produse din cereale sunt permise persoanele cu studii superioare speciale sau cu studii medii de specialitate care dețin tehnica analizei HPLC, au primit pregătire corespunzătoare și au experiență într-un laborator chimic.

. Condiții de măsurare

Temperatura ambiantă de la 15 la 25 °С.

Umiditatea relativă a aerului nu mai mult de 80% la 25 °С.

Presiune atmosferică 730 - 760 mm Hg.

Tensiune de alimentare: 210 - 220 V. Frecventa AC: 45 - 50 Hz.